SCID-huマウスによるSLE発症機構の解明:病的自己抗体産生におけるB細胞-T細胞相互作用の解析と抗接着因子療法の臨床応用への可能性に関する研究

使用SCID-hu小鼠阐明SLE发病机制：分析病理性自身抗体产生中B细胞-T细胞相互作用以及抗粘附因子治疗临床应用的可能性研究

• 批准号: 08670525
• 负责人: 白井 輝
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670525/
• 关键词: SCID-huマウス; ヒト免疫系; T細胞B細胞相互作用; B細胞活性化; 抗接着因子療法; MHCクラスII分子; LFA1

[目的]1)同一のヒト免疫系をできるだけ多くのSCIDマウスに均一に再構築するための方法論を確立し、2)各種抗接着因子抗体のヒトB細胞活性化に与える影響を解析する。[結果]1)i)ヒトリンパ球採取の方法:通常の末梢静脈血採血(一回100ml)により約1.5x10^8個のリンパ球が採取され、最大で約10匹のSCID-huマウスが作成可能であるが、より効率的なリンパ球採取法はリンパ球分離装置(リンファフェレ-シス)によるものである。一回(400mlの血液よりリンパ球分画を分離)で最大6x10^8個のリンパ球採取が可能であり、約30匹のSCID-huマウスを作成可能となる。ii)ヒトリンパ球生着の効率化:SCIDマウスへのヒトリンパ球の生着率は放射線照射(3Gy)と抗アシアロGM1抗体(抗マウスNK細胞)で前処置することにより飛躍的に向上することが示された。実際移植1ヶ月後のマウス血清中のヒト免疫グロブリン値は上記処置にて約10倍増大した。前処置を施行することにより、B細胞活性化解析に必要な移植ヒトリンパ球数は1.5x10^7個/マウスで充分であることが確認された。2)T-B細胞相互作用に関与する各種細胞間因子に対する抗体(抗DR,抗LFA1)のB細胞活性化に与える影響をSCID-huマウスにおいて解析した。抗DR抗体(L243)及び抗LFA1α(CD11a)抗体ともに移植2週後のヒト抗体産生を著明に抑制し、またその抑制効果は抗体のFc部分を除いたF(ag')_2にても認められ、その抑制効果が単に細胞障害作用によるものでなくT-B細胞相互作用を阻害した結果であることが示唆された(第24回日本臨床免疫学会にて報告)。以上よりa)SCID-huマウスにおいてもヒトT-ヒトB細胞相互作用がヒトB細胞活性化に重要であり、b)その相互作用を阻害することによりB細胞活性化をコントロールできることがin vivoの系で明らかにされた。現在SLEおよびRA患者の臨床検体を用い、その臨床応用の可能性につき検討を加えている。

[目标] 1）建立一种方法，以将相同的人类免疫系统统一地重建到尽可能多的SCID小鼠中，以及2）分析各种抗粘附因子抗体对人B细胞激活的影响。 [结果] 1）i）如何收集人类淋巴细胞：可以通过常规的外周静脉血（每次疗程100ml）收集约1.5x10^8淋巴细胞，并且可以产生多达10个SCID-HU小鼠，但可以通过收集淋巴细胞的有效方法来收集淋巴细胞（Lymphocyphocyte seption（Lymphocyphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）（Lymphocphocyte）。可以一次收集高达6x10^8的淋巴细胞（从400毫升的血液中分离淋巴细胞级分），从而可以创建约30只SCID-HU小鼠。 ii）人类淋巴细胞植入的效率：已经表明，可以通过辐射（3GY）和抗亚病（3GY）和抗亚病毒抗体（抗小鼠NK细胞）进行预处理来大大改善人类淋巴细胞对SCID小鼠的植入率。实际上，植入后一个月的小鼠血清中的人类免疫球蛋白水平增加了约10倍。通过进行预处理，可以证实在1.5x10^7/小鼠时，移植用于B细胞激活分析的人类淋巴细胞数量足够。 2）在SCID-HU小鼠中分析了抗体（抗DR，抗LFA1）对参与B细胞激活的各种细胞间相互作用的各种细胞间因子的影响。 Both the anti-DR antibody (L243) and anti-LFA1α (CD11a) antibodies significantly inhibited human antibody production two weeks after implantation, and the inhibitory effect was also observed in F(ag')_2, which excluded the Fc portion of the antibody, suggesting that the inhibitory effect was not merely due to cytotoxic effects but was the result of inhibiting T-B cell interaction (reported在日本第24届临床免疫学学会上）。从上述过程中，在体内系统中已经揭示了a）a）人类T-hu b细胞相互作用对于SCID-HU小鼠的人体B细胞激活很重要，并且B）B）B）可以通过抑制相互作用来控制B细胞的激活。当前，来自SLE和RA患者的临床标本正在用于检查其潜在的临床应用。