肝不全治療をめざした新しい肝細胞分化増殖因子の探索

寻找新的肝细胞分化和生长因子以治疗肝衰竭

• 批准号: 08671503
• 负责人: 絵野沢 伸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671503/
• 关键词: 肝不全; 肝上皮幹細胞; 分化増殖因子; 胎児; 薬物代謝活性; 7-エトキシクマリン

本研究では、今までに肝再生因子の検索の対象となったことのない、胎児組織を中心に、また、検索の指標を単に放射性チミジン取込みといった細胞増殖ではなく、新しい観点から肝再生因子を探究し、新規な肝不全治療法を創生することを目的としている。本研究では、増殖因子の検出法として従来行われてきた、培養肝実質細胞の放射性チミジンの取込みではなく、肝の代表的分化機能である、薬物代謝能(7-エトキシクマリン脱エチル化活性)を用いた。まず、その検出法の簡便化のためにC18逆相カラムHPLCによる薬物代謝活性迅速定量法を確立し、少量(0.5〜1ml)の培養上清から直接に、しかも従来と同レベル(10nmol/1)の検出限界を有する検出法を確立した。一方、胎児組織の50%ホモジネートは37℃でゲル化することがわかり、肝細胞をゲル内培養することができた。この条件下の初代培養で、薬物代謝活性は、今のところ、EHSジェル(商品名マトリジェル)内培養の約半分の期間、維持されることがわかった。すなわち、EHSジェルの場合、弱いながら約30日にわたり薬物代謝活性が検出されるが、上記胎児組織ジェル内培養では10〜15日間に渡り、活性が検出できた。従来のコラーゲンコートディッシュ培養では活性維持が3日程度であることを考えると、この新規培養法において肝細胞の分化機能維持に有利な条件があると期待される。現在、胎児の週齢を変化させて、維持のできる最適条件を検討している。一方、肝上皮幹細胞の取得のために、コリン欠乏食で飼育したラット肝より吉里の方法に従い、小型肝細胞の取得を試みた。長期生存可能な細胞コロニーが観察され、現在、その細胞生物学的性状について検討している。

This study で は, today ま で に liver regeneration factor の 検 cable の is like と seaborne な っ た こ と の な い, tire where organization に を center, ま た, 検 の index を 単 に radioactive チ ミ ジ ン take 込 み と い っ た cells raised colonization で は な く, new し い 観 point か ら liver regeneration factor し を inquiry, new rules な liver insufficiency therapy を creation す る こ と を purpose と し て い る. This study で は, raised colonization factor の 検 out method と し て 従 come わ れ て き た, cultivate liver be stromal cells の radioactive チ ミ ジ ン の take 込 み で は な く, liver の representative function of differentiation で あ る, 薬 metabolic energy (7 - エ ト キ シ ク マ リ ン エ off チ ル activity) を with い た. ま ず, そ の 検 out method の easy の た め に C18 reverse phase カ ラ ム HPLC に よ る 薬 し を metabolic activity of rapid quantitative method established, a small amount (0.5 ~ 1 ml) の culture supernatant か ら に directly, し か も 従 to と with レ ベ ル (10 nmol / 1) の 検 out limit を have す る を 検 out the method to establish し た. Side, where organization の 50% ホ モ ジ ネ ー ト は 37 ℃ で ゲ ル change す る こ と が わ か り, liver cell を ゲ ル in cultivating す る こ と が で き た. こ の の under the condition of original culture で, 薬 は metabolic activity, today の と こ ろ, EHS ジ ェ ル (trade name マ ト リ ジ ェ ル) develop の within about half a minute, maintain さ during の れ る こ と が わ か っ た. す な わ ち, EHS ジ ェ ル の occasions, weak い な が ら about 30 に わ た り 薬 content metabolic activity が 検 out さ れ る が, written tire where organizations ジ ェ ル in cultivating で は 10 ~ 15 day に り watanabe, active が 検 out で き た. 従 to の コ ラ ー ゲ ン コ ー ト デ ィ ッ シ ュ cultivate で は active maintaining が 3rd level で あ る こ と を exam え る と, こ の new rules culture method に お い の て liver cells differentiation function maintain に な advantages が あ る と expect さ れ る. Now, the 児 児 cycle 齢を changes させて and maintains the <s:1> で る る る optimal conditions を検 seek て て る る る. Side and liver epithelial stem cells の の た め に, コ リ ン owe lack food で rearing し た ラ ッ ト liver よ り giri の way に 従 い and small hepatocellular の を try み た. Long-term survival may な cells コ ロ ニ ー が 観 examine さ れ, now, そ の cell biology character に つ い て beg し 検 て い る.

项目成果

Enosawa et al.: "An attempt to add blological functions by genetic engineering in order to produce high performance bioreactor cells for hybrid artificial liver." Cell Transplantation. (in press). (1997)

Enosawa 等人：“尝试通过基因工程添加生物功能，以便生产用于混合人工肝的高性能生物反应器细胞。”

絵野沢,他: "血中アンモニアの選択的除去を目的としたグルタミン合成酵素固定化ゲルの調整と機能評価" 人工臓器. (1996)

Enozawa 等人：“用于选择性去除血氨的谷氨酰胺合成酶固定凝胶的制备和功能评价”人工器官（1996）。

Enosawa et al.: "Examination of 7-ethoxycoumarin deethylation and ammonia removal activities in 31 hepatocyte cell lines." Cell Transplantation. (1996)

Enosawa 等人：“检查 31 种肝细胞系中的 7-乙氧基香豆素脱乙基化和氨去除活性。”