肝不全治療をめざした新しい肝細胞分化増殖因子の探索

寻找新的肝细胞分化和生长因子以治疗肝衰竭

• 批准号: 08671503
• 负责人: 絵野沢 伸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671503/
• 关键词: 肝不全; 肝上皮幹細胞; 分化増殖因子; 胎児; 薬物代謝活性; 7-エトキシクマリン

本研究では、今までに肝再生因子の検索の対象となったことのない、胎児組織を中心に、また、検索の指標を単に放射性チミジン取込みといった細胞増殖ではなく、新しい観点から肝再生因子を探究し、新規な肝不全治療法を創生することを目的としている。本研究では、増殖因子の検出法として従来行われてきた、培養肝実質細胞の放射性チミジンの取込みではなく、肝の代表的分化機能である、薬物代謝能(7-エトキシクマリン脱エチル化活性)を用いた。まず、その検出法の簡便化のためにC18逆相カラムHPLCによる薬物代謝活性迅速定量法を確立し、少量(0.5〜1ml)の培養上清から直接に、しかも従来と同レベル(10nmol/1)の検出限界を有する検出法を確立した。一方、胎児組織の50%ホモジネートは37℃でゲル化することがわかり、肝細胞をゲル内培養することができた。この条件下の初代培養で、薬物代謝活性は、今のところ、EHSジェル(商品名マトリジェル)内培養の約半分の期間、維持されることがわかった。すなわち、EHSジェルの場合、弱いながら約30日にわたり薬物代謝活性が検出されるが、上記胎児組織ジェル内培養では10〜15日間に渡り、活性が検出できた。従来のコラーゲンコートディッシュ培養では活性維持が3日程度であることを考えると、この新規培養法において肝細胞の分化機能維持に有利な条件があると期待される。現在、胎児の週齢を変化させて、維持のできる最適条件を検討している。一方、肝上皮幹細胞の取得のために、コリン欠乏食で飼育したラット肝より吉里の方法に従い、小型肝細胞の取得を試みた。長期生存可能な細胞コロニーが観察され、現在、その細胞生物学的性状について検討している。

In this study, the liver regeneration factor, the liver regeneration factor, the index of the liver regeneration factor, the radioactive index, and the fetal tissue center are all the same. Take 込みといったcell proliferationではなく, newしいPointからLiver regeneration factorをExplorationし, new rulesなLiver insufficiency treatment methodをcreationすることをpurposeとしている. The purpose of this study is to use the method of extracting proliferative factors and the method of culturing hepatic cytoplasmic cells to produce radioactive substances. The liver's representative differentiation function, the liver's differentiation function, and its metabolizable energy (7-erythrolysis activity) are used. Simplified まず, その検出 Method のためにC18 reverse phase カラムHPLC による斬 substances rapid quantification method を Established し, small amount (0.5 ~1ml) of the culture supernatant, the culture supernatant can be directly used, and the limit of the culture supernatant of the same レベル(10nmol/1) can be established. On the one hand, 50% of the fetal tissue was cultured in sterilized tissue at 37°C, and the liver cells were cultured in sterilized cells. Initial culture under the same conditions, drug metabolism activity, current のところ, EHS ジェル( The product is cultivated in the product under the brand name "Matotron" for about half a minute and maintained as long as it lasts.すなわち, EHS ジェルの occasion, weak いながらAbout 30 days にわたり斬物 metabolic active が検出さThe above-mentioned fetal tissue culture can be carried out within 10 to 15 days, and the activity can be released within 10 to 15 days. The activity of the のコラーゲンコートディッシュ culture is maintained for 3 days. The new regulation culture method and the favorable conditions for maintaining the differentiation function of liver cells are expected. Now, the optimum condition of the embryo is maintained and the optimal conditions are maintained. On the one hand, the method of obtaining liver epithelial stem cells, the method of raising liver epithelial stem cells, and the method of obtaining small liver cells are as follows. Long-term survival is possible, and the characteristics of cell biology are now available.

项目成果

Enosawa et al.: "An attempt to add blological functions by genetic engineering in order to produce high performance bioreactor cells for hybrid artificial liver." Cell Transplantation. (in press). (1997)

Enosawa 等人：“尝试通过基因工程添加生物功能，以便生产用于混合人工肝的高性能生物反应器细胞。”

絵野沢,他: "血中アンモニアの選択的除去を目的としたグルタミン合成酵素固定化ゲルの調整と機能評価" 人工臓器. (1996)

Enozawa 等人：“用于选择性去除血氨的谷氨酰胺合成酶固定凝胶的制备和功能评价”人工器官（1996）。

Enosawa et al.: "Examination of 7-ethoxycoumarin deethylation and ammonia removal activities in 31 hepatocyte cell lines." Cell Transplantation. (1996)

Enosawa 等人：“检查 31 种肝细胞系中的 7-乙氧基香豆素脱乙基化和氨去除活性。”