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異種移植拒絶反応における標的抗原の同定

异种移植排斥中靶抗原的鉴定

基本信息

批准号：
07671348
负责人：
絵野沢伸
金额：
$ 1.02万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671348/
关键词：
異種移植ラットハムスター Western blot Woodruff assay

项目摘要

臓器移植は種々の優秀な免疫抑制剤の出現によって世界的に末期臓器不全の根治療法として認知されるようになった。しかしながら、この結果深刻なドナー不足が起きつつあり、ドナーをヒト以外の動物に求める異種移植について真剣に検討されるべき時期を迎えている。我々の研究によりハムスターからラットへの異種心移植がレシピエントの脾摘出と免疫抑制剤デオキシスパーガリン投与によって20日前後という長期間にわたり生着することがわかった。そこで問題となるのは同種異系移植と同様に移植後2週間前後に起きる液性免疫反応と細胞性免疫反応である。脾摘、薬剤併用群において移植後1週間以降から抗ドナー抗体は徐々に増加する。しかし移植心が停止した時点での抗ドナー抗体価は無処置群における急激な増加に比し穏やかで、液性免疫反応のみが拒絶に関わっているのではないと推察された。実際、in vitroのリンパ球混合培養で異種抗原は同種異系抗原ほどリンパ球活性化を起こさないが、ある種のT細胞(Th2と考えられる)はよく活性化することがわかっている。このような時期にドナー臓器のいかなる抗原が拒絶反応を惹起し標的とされるかを同定し、さらに長期の異種移植片生着をめざすことが本研究の目的である。ハムスター臓器に対するラットの免疫応答反応を見るためにハムスター脾細胞を筋注し、抗ハムスターラット血清を得た。この血清を常法に従いピオチン化し、ハムスター脾細胞を脱核後、SDSポリアクリルアミドゲルにて電気泳動後、ウェスタンブロットを行った。ビオチン化抗血清と2次発色試薬でバンドを検出したところ、数本のバンドが見られた。それぞれのバンドのタンパク質はまだ不明であるが、200Kのものはリンパ球共通抗原(Lymphocyte Common Antigen、LCA)と思われた。現在、抗LCAモノクローナル抗体(OX-1)と競合させることによって、そのバンドがLCAであるか確認中である。一方、前述のようにハムスター脾細胞で免疫したラットより、ナイロンカラムにてTリンパ球を粗精製したのちに、ブロッティング膜上で保温し、細胞の集積を顕微鏡にて観察した。この場合は、抗体によるウェスタンブロットほどの鋭敏な集積反応は見られなかった。感度を高めるために、リンパ球を3H-チミジンにて標識する方法を現在検討している。この場合も、200Kのあたりに放射活性の若干の増加が見られている。

The emergence of an excellent immunosuppressive agent for organ transplantation has led to the development of a worldwide system of radical therapy for organ failure. The results are profound, and the lack of sufficient evidence indicates that animals other than xenografts are seeking to be transplanted. In our research, we found that the immune suppression of xenotransplantation occurred in the middle of the 20th day. The immune response to allogeneic transplantation and allogeneic transplantation began two weeks after transplantation. The anti-tumor antibody level increased gradually within 1 week after transplantation. When the transplant heart stops, the anti-tumor antibody is not treated, the acute stimulation is increased, and the liquid immune reaction is rejected. In fact, in vitro and in vitro mixed culture, heterogeneous antigens and allogeneic antigens are activated, and T cells (Th2 and Th3) are activated. The purpose of this study is to determine the time frame for the development of xenografts, and to identify antigens that refuse to respond to the challenge. The immune response of the spleen cells and the anti-immune response of the spleen cells were detected. The serum is purified and purified, and the spleen cells are enucleated and purified by SDS. The antiserum for the second time was detected and the number of samples was determined. The anti-lymphocyte common antigen (LCA) is an anti-lymphocyte Common antigen (LCA). Now, the anti-LCA antibody (OX-1) is confirmed. In one aspect, the spleen cells were purified and incubated, and the accumulation of cells was observed under microscope. In this case, the antibody can be used to detect the presence of a sensitive substance. The method of identification of high sensitivity, high sensitivity and high sensitivity is discussed. In this case, 200K and 200K, some increases in radioactivity can be seen.