異種移植拒絶反応における標的抗原の同定

异种移植排斥中靶抗原的鉴定

• 批准号: 07671348
• 负责人: 絵野沢 伸
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671348/
• 关键词: 異種移植; ラット; ハムスター; Western blot; Woodruff assay

臓器移植は種々の優秀な免疫抑制剤の出現によって世界的に末期臓器不全の根治療法として認知されるようになった。しかしながら、この結果深刻なドナー不足が起きつつあり、ドナーをヒト以外の動物に求める異種移植について真剣に検討されるべき時期を迎えている。我々の研究によりハムスターからラットへの異種心移植がレシピエントの脾摘出と免疫抑制剤デオキシスパーガリン投与によって20日前後という長期間にわたり生着することがわかった。そこで問題となるのは同種異系移植と同様に移植後2週間前後に起きる液性免疫反応と細胞性免疫反応である。脾摘、薬剤併用群において移植後1週間以降から抗ドナー抗体は徐々に増加する。しかし移植心が停止した時点での抗ドナー抗体価は無処置群における急激な増加に比し穏やかで、液性免疫反応のみが拒絶に関わっているのではないと推察された。実際、in vitroのリンパ球混合培養で異種抗原は同種異系抗原ほどリンパ球活性化を起こさないが、ある種のT細胞(Th2と考えられる)はよく活性化することがわかっている。このような時期にドナー臓器のいかなる抗原が拒絶反応を惹起し標的とされるかを同定し、さらに長期の異種移植片生着をめざすことが本研究の目的である。ハムスター臓器に対するラットの免疫応答反応を見るためにハムスター脾細胞を筋注し、抗ハムスターラット血清を得た。この血清を常法に従いピオチン化し、ハムスター脾細胞を脱核後、SDSポリアクリルアミドゲルにて電気泳動後、ウェスタンブロットを行った。ビオチン化抗血清と2次発色試薬でバンドを検出したところ、数本のバンドが見られた。それぞれのバンドのタンパク質はまだ不明であるが、200Kのものはリンパ球共通抗原(Lymphocyte Common Antigen、LCA)と思われた。現在、抗LCAモノクローナル抗体(OX-1)と競合させることによって、そのバンドがLCAであるか確認中である。一方、前述のようにハムスター脾細胞で免疫したラットより、ナイロンカラムにてTリンパ球を粗精製したのちに、ブロッティング膜上で保温し、細胞の集積を顕微鏡にて観察した。この場合は、抗体によるウェスタンブロットほどの鋭敏な集積反応は見られなかった。感度を高めるために、リンパ球を3H-チミジンにて標識する方法を現在検討している。この場合も、200Kのあたりに放射活性の若干の増加が見られている。

Viscera transplant は kind 々 の excellent な immunosuppression tonic の appear に よ っ て late に viscera of the world is not complete の curatie treatment と し て cognitive さ れ る よ う に な っ た. し か し な が ら, こ の results deep な ド ナ ー insufficient が up き つ つ あ り, ド ナ ー を ヒ ト outside の animal め に o る xenotransplantation に つ い て really 剣 に beg さ 検 れ る べ を き period to meet え て い る. I 々 の research に よ り ハ ム ス タ ー か ら ラ ッ ト へ の heterogeneous heart transplant が レ シ ピ エ ン ト の spleen extraction と immunosuppression tonic デ オ キ シ ス パ ー ガ リ ン cast with に よ っ て after 20 と い う between long-term に わ た り with す る こ と が わ か っ た. そ こ で problem と な る の は with others in the same vision system transplantation と に に up before and after the two weeks after the transplantation of き る fluid immunity against 応 と cell immunity against 応 で あ る. The combination of splenic extraction and drug group にお て て decreases the <s:1> ら anti-ド ナ <e:1> antibody gradually 々に increases する within one week after transplantation. し か し transplanted heart が stop し た point で の resistance ド ナ ー antibody 価 は no 処 set group of に お け る nasty shock な rights than add に し one や か で, liquid immunity against 応 の み が refused に masato わ っ て い る の で は な い と push examine さ れ た. Be international, the in vitro の リ ン パ ball mixed culture で heterologous antigen は the same vision of antigen ほ ど リ ン パ shot activeness を こ さ な い が, あ る の T cells (Th2 と exam え ら れ る) は よ く activeness す る こ と が わ か っ て い る. こ の よ う な period に ド ナ ー viscera の い か な る antigen が refused to reverse 応 を provoked し mark と さ れ る か を with し, さ ら に long-term の xenotransplantation piece with を め ざ す こ と が の purpose this study で あ る. ハ ム ス タ ー viscera に す seaborne る ラ ッ ト の immune 応 answer against 応 を see る た め に ハ ム ス タ を muscle note し ー spleen cells, resist ハ ム ス タ ー ラ ッ ト serum を た. こ の serum を method often に 従 い ピ オ チ ン し, ハ ム ス タ を ー spleen cells after nuclear, SDS ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル に て 気 swimming after, ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line っ た. ビ オ チ ン the antiserum と 発 color try twice 薬 で バ ン ド を 検 out し た と こ ろ, several の バ ン ド が see ら れ た. そ れ ぞ れ の バ ン ド の タ ン パ ク qualitative は ま だ unknown で あ る が, 200 k の も の は リ ン パ ball Common Antigen (Lymphocyte Common Antigen, LCA) と think わ れ た. Now, LCA モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies (OX - 1) と co-opetition さ せ る こ と に よ っ て, そ の バ ン ド が LCA で あ る か confirmed in で あ る. One party, the foregoing の よ う に ハ ム ス タ ー spleen cells で immune し た ラ ッ ト よ り, ナ イ ロ ン カ ラ ム に て T リ ン パ ball を crude refining し た の ち に, ブ ロ ッ テ ィ ン グ insulation membrane で し, cell の set product を 顕 micromirror に て 観 examine し た. <s:1> <s:1> occasion, antibody によるウェスタ ブロットほ ブロットほ <e:1> <s:1> acute sensitivity な aggregative reaction 応 応 see られな った った った. High sensitivity を め る た め に, リ ン パ ball を 3 h - チ ミ ジ ン に て logo す る method を now beg し 検 て い る. The <s:1> <s:1> occasion <e:1>, 200K あた に に radiation activity <s:1> increased by が see られて る る る.

项目成果

Suzuki, Enosawa, Kakefuda, et al: "Long-term graft acceptance in allogrofred rats and dogs by treatment with a novel immunosuppressant FTY720." Transplantation Proceedings. (in press).

Suzuki、Enosawa、Kakefuda 等人：“通过新型免疫抑制剂 FTY720 治疗，同种异体移植大鼠和狗的长期移植接受度。”

Enosawa, Suzuki, Kakefuda et al: "Examination of 7-ephoxyconmary deathylation and ammonic vemoval activity in hepatocyte cell lines" Cell Transplantation. (in press).

Enosawa、Suzuki、Kakefuda 等人：“肝细胞系中 7-ephoxyconmary 脱酰化和氨排出活性的检查”细胞移植。

Kimura, Enosawa, Kamada et al: "Evidence that the elevation of soluble MHC class I antigens in the serum precedes the onset of grafr-versus-host disease" Transplant Immunology. 3. 281-286 (1995)

Kimura、Enosawa、Kamada 等人：“有证据表明血清中可溶性 MHC I 类抗原的升高先于移植物抗宿主病的发生”移植免疫学。

Suzuki, Enosawa, Kakefuda et al: "A novel immunosuppressant, FTY 720, with unique mechanism of action in duces long-term graft acceptance in rat" Transplantation. 61. 200-205 (1996)

Suzuki、Enosawa、Kakefuda 等人：“一种新型免疫抑制剂，FTY 720，具有独特的作用机制，可诱导大鼠长期移植物接受” 移植。