甲状腺特異的転写因子(TTF-1)の遺伝子発現の解明およびTTF-1異常症の解析

甲状腺特异性转录因子（TTF-1）基因表达的阐明和TTF-1异常分析

• 批准号: 08671144
• 负责人: 斎藤 司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671144/
• 关键词: 甲状腺; 遺伝子; 転写因子

われわれは既にクローニングしているラットTTF-1遺伝子を用いて、まずその転写開始点を確認した。FRTL-5細胞より精製したmRNAを鋳型にして5′RACE法を用いた。5′RACE法にて-1902nucleotide上流に転写開始点を確認した。また、-14と-1244の間にイントロンがあることを見い出した。RNAseプロテクション法およびプライマーイクステンション法にても同様の部位に転写開始点を確認した。さらに、ノーザンブロット解析にてこの新たな転写開始点から転写されたRNAトランスクリプトが確認された。次にこの遺伝子のプロモーターの転写活性を検討するため、クロラムフェニコールトランスフェラーゼ(CAT)レポーター遺伝子をを組み込んだベクターにこのTTF-1遺伝子の上流をいくつかの長さに切って組み込み、CAT活性を測定した。CAT活性は-2051と-2021との間で明らかな上昇を認め、この部位が転写活性に重要であることを示唆した。この転写活性は甲状腺細胞特異的で、他の培養肝細胞(BRL-3A cell)では認められなかった。このプロモーター部分の二本鎖DNAをプローベにしてゲルシフト解析を行うと、甲状腺細胞で特異的に結合する核蛋白が認識された。このことより、この核蛋白(転写因子)が甲状腺特異的にTTF-1遺伝子の転写を促進している可能性が示唆された。以上より、甲状腺特異的転写因子(TTF-1)の遺伝子発言の解明は進みつつあるが、現在TTF-1異常症の解析および他の研究が進行中である。

The TTF-1 gene is used to identify the starting point of the gene. FRTL-5 cells were purified and mRNA was typed by 5′RACE. 5′RACE method-1902 nucleotide upstream writing start point confirmed 14:1244: 12,45: 12,46: 1,46: 1,45: 1,46: 1,4 The RNAse response method is used to identify the start point of the response at the same location. This is the first time that we've seen this. The activity of TTF-1 gene was determined by the method of enzyme analysis and CAT activity determination. CAT activity increased between-2051 and-2021, and the activity of CAT increased between-2051 and-2021. This activity is specific to thyroid cells and cultured hepatocytes (BRL-3A cells). The two essential DNA sequences of the thyroid cells were analyzed and the specific nucleoproteins were recognized. The possibility of promoting the transcription of TTF-1 gene in thyroid-specific cells was suggested. The analysis of TTF-1 abnormalities and other studies are ongoing.