トロンボポエチンの受容体(C-Mpl)との親和性と血小板造血調節機構

血小板生成素与受体（C-Mpl）的亲和力及血小板造血调节机制

• 批准号: 08671208
• 负责人: 佐藤 武幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671208/
• 关键词: トロンボポエチン; 結合親和性; C-Mpl; 受容体; 調節; 巨核球; サイトカイン; フォルボールエステル

トロンボポエチン(TPO,C-Mplリガンド)は、巨核球および血小板造血の重要な役割をc-Mplリセプターの活性化を通じて果たしていると考えられている。我々は、我々が樹立した巨核球系細胞株CMKを用い、TPO(米国ジェネンテック社より供与)等のサイトカインおよびDMSO,フォルボールエステルのTPO結合への効果を、^<125>l-TPO(米国ジェネンテック社より供与)を用い検討した。結合試験は至適の条件である、15℃2時間にて行った。CMKを種々の濃度のTPOで前処理し、洗浄後細胞表面に結合したTPOを除去するために更に3時間TPOの含まない培地で培養し(この操作で90%以上のTPOが細胞表面より除かれる)、その後_<125>l-TPOの結合を調べたところ、処理量に従って_<125>l-TPOの結合は減少した(平均70%)。TPOによる阻害は前処理30分後にはすでに認められ、3時間後には最大に達した。Scatchard解析により、これは親和性の低下ではなく受容体数の減少と判明した。この減少は正常骨髄巨核球においても認められた。TPOによる阻害はCMKにおいてほとんどの蛋白質合成が阻害される濃度のサイクロヘキシミドにより阻害されなかった。lL-3,lL-6およびDMSO(いずれもCMKを分化させる)の前処置では、_<125>l-TPOの結合は阻害されなかったが、フォルボールエステル(プロテインキナーゼC活性物質)前処置により強く阻害された。この阻害も受容体数の減少であり、サイクロヘキシミドにより阻害されなかった。TPOおよびプロテインキナーゼCによる阻害は今後の興味ある研究課題であり、正常または病気時の血小板造血についての研究に寄与すると思われる。

TPO,C-Mpl, C-Mpl We have established megakaryocytic cell line CMK, TPO(American Journal of Biochemistry) and other media, such as DMSO, TPO <125>binding effect, and TPO (American Journal of Biochemistry). Combined with the appropriate conditions, 15℃ for 2 hours. The concentration of CMK and TPO was adjusted before treatment, after washing, the binding of TPO to the cell surface was removed, and after 3 days of culture with TPO (more than 90% of TPO to the cell surface was removed)<125>, the binding of TPO to the cell surface was decreased <125>(average 70%). TPO is the highest after 30 minutes. Scatchard analysis shows that the number of receptors decreases due to low affinity. This is a reduction in megakaryocytes. The concentration of TPO in the protein synthesis of CMK was determined. lL-3,lL-6 and DMSO(in the presence of CMK<125>) were used as pre-treatment inhibitors for the binding of l-TPO and l-TPO. The number of objects affected by the resistance is reduced. TPO is a new research topic for future research on platelet hematopoiesis during normal disease.

项目成果

Yokoe H.Sato T.et al.: "Induction of polyploidization in the human erythreleukenia cell line(HEL) by the protein kinase inhibibotal (K21-2a) and the phorborester-TPA" Leuk,Lymph,. (in press).

Yokoe H.Sato T.等人：“通过蛋白激酶抑制剂 (K21-2a) 和 phorborester-TPA 在人红白血病细胞系 (HEL) 中诱导多倍化”Leuk，Lymph，。