骨髄異形成症候群における骨髄造血細胞のアポトーシス:免疫電顕的検討

骨髓增生异常综合征中骨髓造血细胞凋亡：免疫电镜研究

• 批准号: 08671207
• 负责人: 村上 博和
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671207/
• 关键词: MDS; apotosis; ultnastructure

(目的)骨髄異形性症候群(MDS)における無効造血は血球のアポトーシスによると考えられており、Raza A.らは光顕TUNEL法を用いて証明している。しかし、光顕レベルの観察では細胞形態の判別が困難で、顆粒球、赤芽球、巨核球のどの細胞がアポトーシスを起こしているか不明である。この点を解消するために電顕TUNEL法を開発し、血球毎のアポトーシスの検討ができるようにする。(方法)(1)電顕TUNEL法の開発-培養細胞(K562)においては、Etoposideによりアポトーシスを起こし、前、2時間後、4時間後、6時間後、12時間後、24時間後にそれぞれ細胞を回収し、パラフォルムアルデヒドで固定後、PBSで洗浄しTUNEL反応液で60分間インキュベートする。PBSで洗浄後、ベンチジン法を行い、透過電顕にて観察する。(2)MDS患者骨髄標本における電顕TUNEL法の応用-骨髄穿刺のつぶし標本上で電顕TUNEL法を行う。最後にスライドガラスより標本を剥離し、包理し電顕標本とする。(結果)(1)培養細胞(K562)のEtoposideによるアポトーシスは、電顕TUNEL法で2時間後に確認された。細胞形態の保持も良好で十分細胞の種類判別が可能であった。一般電顕では、明らかなアポトーシス(核のクロマチン凝集など)は4時間後にしか確認できなかった。(2)MDS患者4人の骨髄において、電顕TUNEL法を施行した。赤芽球におけるアポトーシスが最も確認しやすかった。顆粒球では、症例によりアポトーシスが確認できない症例も2例あった。巨核球のアポトーシスも3例で確認できた。(考察)電顕TUNEL法は一般電顕に比し明らかに早期のアポトーシスを検出可能であり、また血球形態の保持も良好で臨床検体にも応用可能であった。MDS症例では赤芽球のアポトーシスが強い傾向であったが、さらに症例の追加が必要と考えられた。

Objective: To investigate the pathogenesis of MDS by TUNEL method. It is difficult to distinguish the cell morphology by light and light, and the cell morphology of granulocytes, erythrocytes and megakaryocytes is unknown. This is the first time that a cell has been detected. (Method)(1) Development of the electro-TUNEL method-Cultured cells (K562) were incubated at 0, 1, 2, 4, 6, 12, and 24 minutes after initiation, 1, 2, 4, 6, 12, and 24 minutes after initiation, 1, 6, 12, and 24 minutes after initiation, 1, 6, 12, and 24 minutes after initiation, 1, 6, 12, and 24 minutes after initiation, 1, 6, 12, and 24 minutes after initiation. After PBS washing, the process is carried out, and the detection is carried out through electricity. (2) The use of TUNEL in MDS patients with bone marrow puncture. Finally, the paper is divided into two parts: the first part is the separation of the material, the second part is the separation of the material and the third part is the separation of the material. (Results)(1) Etoposide-induced apoptosis of cultured cells (K562) was confirmed 2 hours later by electroporation TUNEL. Cell morphology is well maintained and cell type discrimination is possible. General electric shock, bright light, light (2) 4 MDS patients were diagnosed by TUNEL method. The most important thing to do is to confirm the status of the child. Granulocytes are the most common type of disease. 3 Cases of Megakaryocytic Spheres Confirmed (Investigation) Electrophoretic TUNEL method may be able to detect early detection of loss of blood cells compared with general electrophoresis, and may be useful in clinical studies because of good maintenance of blood cell morphology. MDS cases are not easy to detect.