エリスロポエチン遺伝子の発現調節機構の解析

促红细胞生成素基因表达调控机制分析

• 批准号: 08671251
• 负责人: 今川 重彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671251/
• 关键词: エリスロポエチン遺伝子; GATA転写因子; プロモーター

我々は、従来エリスロポエチン(Epo)遺伝子の発現調節機序解析を行っている。最近では、cytochrome b-typeのへム蛋白がEpoの酸素センサーであると報告されたが、とするとH_2O_2がこの酸素センサーと転写因子を連絡するintracellular messangerである可能性が考えられる。そこでH_2O_2をHep3B細胞へ添加すると用量依存性にEpo蛋白・mRNA量が減少することを認めた。またH_2O_2によりGATA転写因子の発現は用量依存性に増加することを認めた。そこでヒトEpo遺伝子のプロモーター部位及びエンハンサー部位をluciferase遺伝子と結合させたPwtをHep3B細胞へ導入し、低酸素下で培養後luciferase活性を検討した結果、H_2O_2投与によりEpoのプロモーター活性は低下するがこれはcatalaseの前処理により解除されるためEpoプロモーター活性の低下はH_2O_2に特異的と考えられた。さらにPwtのGATA結合部位のmutant(Pm7)を用い同様の検討を行ったところ、Epoのプロモーター活性の低下は認められなかった。以上よりH_2O_2の効果はGATA転写因子に特異的でありEpoのプロモーター活性を低下させるものと考えられた。さらにmouse GATA-2プロモーター-145〜+171をluciferaseに結合させたmGB_1をHep3B細胞へ導入し、低酸素下でのluciferase活性を検討した結果H_2O_2によりmGATA-2プロモーター活性が亢進し、またcatalase投与によりこの活性亢進は解除されることを確認した。つまりH_2O_2によりGATAプロモーター活性が亢進し、GATA転写因子の発現レベルが亢進するためにEpo遺伝子のプロモーター活性が低下し、Epo遺伝子の発現が低下する機序が考えられた。現在、他の転写因子(HNF4,EAR3/COUP-TF1)に対するH_2O_2のEpo遺伝子発現に対する効果を検討中である。

I 々 従 and 従 came to エリスロポエチ エリスロポエチ (Epo) to leave 伝 sub-string occurrence adjustment mechanism sequence analysis を line って って る る. Recent で は, cytochrome b -type の へ ム protein が Epo の acid element セ ン サ ー で あ る と report さ れ た が, と す る と H_2O_2 が こ の acid element セ ン サ ー と planning write contact factor を す る intracellular messanger で あ る possibility が exam え ら れ る. そ こ で H_2O_2 を Hep3B cells へ add す る と dosage dependence に Epo, protein mRNA, decrease が す る こ と を recognize め た. Youdaoplaceholder0 H_2O_2によ <s:1> GATA転 writing factor occurrence dosage dependence に increase する とを とを とを recognition めた. そ こ で ヒ ト Epo posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー parts and び エ ン ハ ン サ ー parts を luciferase posthumous son 伝 と combining さ せ た Pwt を Hep3B cells へ import し, low acid element under で luciferase activity after cultivating を beg し 検 た results, H_2O_2 cast and に よ り Epo の プ ロ モ ー タ は ー activity is low す る が こ れ は catalase の 処 before Richard に よ り remove さ れ る た め Epo プ ロ モ ー タ ー active low の は H_2O_2 に specific と exam え ら れ た. さ ら に Pwt の GATA binding site の mutant (Pm7) を い with others の 検 line for を っ た と こ ろ, Epo の プ ロ モ ー タ ー active low の は recognize め ら れ な か っ た. Above よ り H_2O_2 の unseen fruit は GATA planning write factor に specific で あ り Epo の プ ロ モ ー タ ー active low を さ せ る も の と exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0 mouse GATA - 2 プ ロ モ ー タ ー - 145 ~ + 171 を luciferase に combining さ せ た mGB_1 を Hep3B cells へ import し, low acid element under で の luciferase activity を beg し 検 た results H_2O_2 に よ り mGATA - 2 プ ロ モ ー タ ー active が hyperthyroidism し, ま た catalase Administration of によ <s:1> <s:1> <s:1> hyperactivity される relieves される とを とを confirms た た. つ ま り H_2O_2 に よ り GATA プ ロ モ ー タ ー active が hyperthyroidism し, GATA planning write factor の 発 now レ ベ ル が hyperthyroidism す る た め に Epo heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー active low が し, traces of Epo 伝 son の 発 now low が す る machine sequence が exam え ら れ た. Now, he の planning write factor (HNF4, EAR3 / COUP - TF1) に す seaborne る H_2O_2 の Epo heritage 伝 son 発 now に す seaborne る unseen fruit を 検 beg in で あ る.

项目成果

Imagawa,S.et al: "Erythropoietin gene expression by hydrogen peroxide" Int.J.Hematol. 64. 189-195 (1996)

Imakawa,S.et al：“过氧化氢促红细胞生成素基因表达”Int.J.Hematol。

Imagawa S.,et al: "Nucleic Acids Symposium Series 35" Kosaku Hirota eds OXFORD UNIVERSITY PRESS OXFORD.UK.1996, 299-p300 (1996)

Imakawa S.,et al:“核酸研讨会系列 35”Kosaku Hirota 编辑 牛津大学出版社 OXFO​​RD.UK.1996, 299-p300 (1996)

Imagawa, S. et al.: "Negative regulation of the erythropoietin gene expression by the GATA transcription factors." Blood. 89. 1430-1439 (1997)

Imakawa, S. 等人：“GATA 转录因子对促红细胞生成素基因表达的负调控。”

Imagawa,S et al: "GATA transcription factors negatively regulate erythropoietin gene" Acta Hematol. 95. 248-256 (1996)

Imakawa,S 等人：“GATA 转录因子负向调节促红细胞生成素基因”Acta Hematol。

Imagawa S.,et al: "Molecular Biology of Hematopoiesis 5" N.G.Abraham eds.Plenum Press,New York, 501-p513 (1996)

今川 S. 等人：“造血分子生物学 5”N.G.Abraham 编辑。Plenum Press，纽约，501-p513 (1996)