口腔病変におけるウィルス感染のパラフィン切片上ポリメラーゼ連鎖反応による検出

石蜡切片聚合酶链反应检测口腔病变中的病毒感染

• 批准号: 08672153
• 负责人: 鈴木 誠
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672153/
• 关键词: 口腔; 唾液腺; EBウィルス; ヘルペスウィルス; サイトメガロウィルス; PCR; in-situ PCR; in-situハイブリダイゼーション

唾液腺炎、口内炎、乳頭腫、白板症、扁平上皮癌など、口腔領域の疾患の発生にウィルスの関与が想定されるものは決して少なくないのであるが、日常の病理検査では、実際にこれらのウィルス感染が確認されることはなかった。そこで、われわれは、通常のパラフィン切片で、高速度かつ簡便に各種ウィルス感染を検出して、口腔疾患におけるウィルス感染の実態を把握したいと考えた。検索対象としたウィルスは、エプスタイン・バ-ウィルス(EBV)、ヒトパピローマウィルス(HPV)各種タイプ、サイトメガロウィルス(CMV)、単純ヘルペスウィルス(HSV)および6B型ヘルペスウィルス(HHV6)、ムンプスウィルス(MV)で、ひろく腫瘍性および炎症性疾患をスクリーニングした。方法は、既知の遺伝子情報から、プライマーを設計し、通常のPCRをおこない、また、DNAプローブあるいはRNAプローブを作製してin-situハイブリダイゼーション(ISH)をおこなった。さらに切片上でPCRをおこない、それぞれの産物に対するプローブを用いてISHで検出した。この結果、唾液腺リンパ上皮腫でEBV、多発性潰瘍をともなう口内炎でHSV、唾液腺炎でCMVのそれぞれの感染細胞とPCR陽性シグナルが確認できた。唾液腺リンパ上皮腫では、原発巣と転移リンパ節を比較して検索をおこなったところ、ISHで検出できない症例でもPCRによってその感染を同定できることが判明した。したがって、検出感度としてはPCRがISHより優れてることを確認できた。しかし、本研究課題では最終的に切片上ポリメラーゼ連鎖反応(IS-PCR)をめざしたが、この方法では陽性シグナルを得ることができなかった。さまざまな条件設定をおこなったものの、不成功の原因は特定できなかった。しかし、パラフィン切片という条件では増幅したDNA断片を細胞核内に係留することができないことの可能性が高いものと推定された。今後は、新鮮材料の凍結切片あるいは塗沫細胞によって実験をおこない、パラフィン切片への応用を確実にする方法を模索する予定である。

Saliva adenitis, mouth inflammation, nipple swelling, white plaque disease, squamous cell carcinoma, oral disease development, daily pathological examination, confirmation of infection, related to the development of oral disease For example, if you want to check the infection status of oral diseases, you can check the infection status of oral diseases easily. For example, if you want to find out more, you can find out more about it by looking at the following items: EBV, HPV, CMV, HSV, 6B, HHV6, MV, etc. Methods: We designed the PCR to detect the DNA sequence, and we designed the DNA sequence to detect the DNA sequence. The product of the PCR was isolated from the sample. Results: Salivary gland epithelial tumors, EBV, multiple ulcers, HSV, salivary adenitis, CMV, infected cells, PCR positive, confirmed. Salivary gland swelling, original development, migration, node comparison, detection, detection, diagnosis, PCR, identification, identification. The PCR is not sensitive to the presence of the virus. The subject of this study is the final section of IS-PCR. The conditions are set, and the reasons for failure are specific. The probability of DNA fragment being trapped in the nucleus is high. In the future, frozen sections of fresh materials will be used to determine the exact method of preparation.

项目成果

Nishikawa S,et al.: "Dentigerous cyst with two impacted teeth." Oral Medicine & Pathology. 1. 60-62 (1996)

Nishikawa S,et al.：“含两颗阻生牙的含牙囊肿。”

朔敬他: "中国の唾液腺リンパ上皮腫におけるEBウィルス感染." 日本病理学会会誌. 85. 149- (1996)

Shuo 等：“中国唾液腺淋巴上皮瘤中的 EB 病毒感染。”日本病理学会杂志 85. 149-（1996）。

Takagi R,et al.: "Squamous cell carcinoma in the maxilla." Journal of Oral Maxillovacial Surgery. 54. 112-115 (1996)

Takagi R,et al.：“上颌骨鳞状细胞癌。”