哺乳類細胞のDNA複製酵素群の発現制御機構の解明

阐明哺乳动物细胞中DNA复制酶的表达控制机制

• 批准号: 08672547
• 负责人: 宮澤 宏
• 金额: --
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672547/
• 关键词: DNAポリメラーゼα; プライマーゼ; 転写制御; ゲルシフトアッセイ; 増殖刺激; 転写因子; E2F

1.発現様式の同じDNAポリメラーゼα/プライマーゼ複合体の4つのサブユニットの転写制御領域の解析4つのサブユニットの転写制御領域1kbには、いずれもTATAボックスは存在せず、Sp1、E2F、AP1など既知の転写因子の結合配列が存在している。また、各上流域の配列を比較したところ、比較的長い共通配列が複数見出されている。このうち特にDNAポリメラーゼ活性を持つ分子量180kDaのサブユニットに関して、詳細な研究を行った。主要なプロモーター活性は、転写開始点から上流241bpまでの範囲にあった。この領域に存在する14bpのパリンドローム配列(-71)に変異を導入すると約50%、20bpのGCボックス(-112)に変異を導入すると、約30%プロモーター活性が減少することから、これらの配列がプロモーター活性に重要なシスエレメントであることが明らかになった。一方、遺伝子上流域をレポーター遺伝子とともにマウスNIH3T3細胞の同調系に導入したところ、レポーターとしてのルシフェラーゼ活性はDNA複製にわずかに先立って上昇し、mRNAレベルとほぼ同じ変動レベルを示した。したがって、増殖刺激に伴うmRNAレベルや蛋白レベルの増加は、少なくともその一部が、転写レベルの増加に起因するものと考えられた。また、-30から+45までの領域を欠失させると、増殖刺激による誘導は見られなくなったことから、この領域が増殖刺激に対する応答に必要であることが示唆された。2.転写に必要な領域に結合する因子の同定14bpのパリンドローム配列(-71)および20bpのGCボックス(-112)に特異的の結合するは蛋白質が、核抽出液中に存在していることを、ゲルシフトアッセイにて確認した。また、増殖刺激に対する応答に必要な領域にも特異的に結合する蛋白質が存在しており、その領域の塩基配列よりE2Fであることが示唆された。

1. The current formula is the same as that of the DNA system, which is the same as that of the complex. 4. In the field of writing and control, it is necessary to analyze the field of 1kb, TATA, E2F, AP1, Sp1, E2F, AP1 and so on. You can see the complex number of the common long-term arrangement of the river basins and the upper river basins. The molecular weight, molecular weight, DNA activity, molecular weight, molecular weight and molecular weight. The main purpose of this paper is to make sure that the activity and the starting point of the write are in the range of high-level 241bp. In the field of information, there is a list of data (- 71). There is an allocation of 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 20%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 50%, 20%, 50%, 50% On the one hand, in the river basin, the NIH3T3 system is the same as that in the river basin. on the other hand, in the river basin, in the basin, in the river basin, in the basin, in the basin, in the Reproductive stimulation is accompanied by mRNA stimulation, which is accompanied by an increase in protein content, an increase in protein content, a reduction in protein content, and an increase in the cause of infection. In the fields of-30 and 45 years of age, there is a lack of knowledge in the field, and in the field of reproductive stimulation, there is a lack of knowledge in the field, and in the field of reproductive stimulation. two。 Write the combination of necessary fields and factors to determine the level of 14bp protein in the 20bp extract, the presence of the protein in the nuclear extract, and the confirmation of the protein in the nuclear extract. The combination of protein and protein in the field of stimulation is necessary to answer the necessary information. The combination of proteins in the field is sensitive, and the E2F gene is used to indicate that it is necessary to do so.