腸内細菌のビタミンB_<12>生合成に関与するアスパラギン酸脱水素酵素の精製

肠道细菌中参与维生素B_<12>生物合成的天冬氨酸脱氢酶的纯化

• 批准号: 08680046
• 负责人: 大杉 匡弘
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Mukogawa Women's University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680046/
• 关键词: ビタミンB_<12>; アスパラギン酸; 脱水素酵素

本研究は、腸内細菌のうち良好はビタミンB_<12>合成菌である。Klebsiella pneumoniae IFO 13541菌株によるアスパラギン酸脱水素酵素の証明のために、酵素の精製を研究の目的とした。1.供試菌株の培養条件と酵素活性との関係本菌株の好気培養においては、本酵素の活性は見られなかった。菌体の培養を目的として当初好気培養での菌体の生産を謀って後、嫌気培養を行った結果、酵素の活性がみられた。しかしながら、菌体の生産は低いが酵素の活性が高かったのは嫌気培養での生育であった。すなわち、本菌株におけるアスパラギン酸脱水素酵素は嫌気下においてのみ生産されることがわかった。2.酵素の精製(1)精製方法の検討補酵素をNADまたはNADPを必要とするので、各種の色素リガンドをしらべた結果、唯一Greenセファロースに吸着したこと、種々のイオン交換カラムでしらべた結果では、また唯一DEAE-Bio-Gelにのみ吸着がみられた。PAGEでの結果からは、いまだNADおよびNADPを補酵素とする数種の活性バンドがみられのでゲル濾過等との組み合わせを行って、今後さらに酵素の精製が残されている。(2)酵素の安定性失活しやすい酵素で、精製に苦心した。検討の結果、2-mercaptoethanolやDTTなどの還元剤の効果とMg,Co,Mnなどの金属イオンの賦活作用が分かった。

In this study, the internal bacteria were found to be in good condition, and B _ & lt;12> synthetic bacteria were isolated from the bacteria. Strain Klebsiella pneumoniae IFO 13541 was isolated from acid dehydrase, acid dehydrase, enzyme and enzyme. 1. The enzyme activity of the test strain was tested under the condition of culture, and the enzyme activity of this strain was tested. The purpose of bacterial culture was to induce the growth of bacteria. After the bacteria were cultured, the results and the activity of enzymes were analyzed. The growth of bacteria, the activity of enzymes, enzymes, enzymes. The strain was infected with acid dehydrase, and the strain was infected with acid dehydrase and acid dehydrase. two。 Enzyme purification (1) the method of purification was used to analyze the necessary results of the enzyme NAD assay NADP, the results of all kinds of pigments, the results of the unique Green assay, the results of the test results, the results of the test results, and the results of the test results of the only DEAE-Bio-Gel. PAGE results showed that several active enzymes were tested by NAD enzyme assay, NADP enzyme assay, enzyme assay and so on. (2) enzyme inactivation, enzyme inactivation. The results of 2-mercaptoethanol DTT test data show that the results of Mg,Co,Mn test show that there is a significant difference in the activity of metal particles.

项目成果

野田、岡村、大杉: "Klebsiella pneumoniae IFO 13541菌株のビタミンB_<12>合成に関与する新規アスパラギン酸脱水素酵素について" ビタミン. 70(4). 194- (1996)

Noda、Okamura、Osugi：“关于肺炎克雷伯菌 IFO 13541 菌株中参与维生素 B_<12> 合成的新型天冬氨酸脱氢酶”维生素 70(4)。