真核靶膜蛋白活性表达系统的构建及大肠杆菌离子转运系统的修饰-猫眼课题宝

真核靶膜蛋白活性表达系统的构建及大肠杆菌离子转运系统的修饰

批准号：

10145222

负责人：

魚住信之

金额：

$1.28万

依托单位：

Nagoya University

依托单位国家：

日本

项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)

财政年份：

1998

资助国家：

日本

项目状态：

已结题

起止时间：

1998 至 --

来源：

https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145222/

关键词：

イオン輸送体 Shaker トポロジー植物大腸菌 KAT1 AKT2

项目摘要

项目成果

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真核生物標的膜蛋白質の表面提示と活性発現系として大腸菌を利用することは、他の真核培養細胞で発現させる場合と比較して、操作性、経済性の点で有効であり、実験労力の低減を可能にする。現在まで難しいと考えられてきた単細胞生物の細菌に真核生物の膜蛋白質を容易に活性発現することが可能となれば、新規の発現系の開発として認知され真核膜蛋白質の分子デザインの研究に大きく寄与する。本研究から以下の成果を得ることができた。1、高等植物のイオン輸送体(KAT1,AKT2,AtKUP1)をK^+取り込み系が変異している大腸菌において活性発現を試みたところ、KAT1,AKT2,AtKUP1はK^+取り込み能を欠損した大腸菌を相補することを見いだした。K^+の初期濃度7.6-10.4mMの範囲では、対照のプラスミドを導入した大腸菌は増殖しなかった。また、イオン孔のアミノ酸が変異しているKAT1は機能しないことが分かっていたが、予想通り大腸菌においてもK^+輸送の欠損変異を相補しなかった。2、 Shaker型K^+チャネルKAT1のトポロジーの決定を行った。疎水性プロットからKAT1には8箇所の疎水性領域(S1,S2、S3,S4、S5,H5,S6,S7)が存在する。推定膜貫通領域の前後に細胞外で活性を示すPhoAを連結した8種類のプラスミドを作成した。解析したところ従来から推定されていS1,S2,S3,S4,S5,S6は膜貫通領域であること、孔を形成するH5と疎水性の度合いが強いS7は膜を貫通していないことが明らかとなった。真核生物由来の膜蛋白質が大腸菌で機能を持って発現することを証明した。さらに、構造と機能の解析が可能であることを示した。

期刊论文(2)

专著(0)

科研奖励(0)

会议论文

UOZUMI et al.: "Determination of trasmembrane topology fo an inuad-redifying potassium channel from Arabidopsis thaliana based on Functional expression in Escherichia coli" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 95(17). 9773-9778 (1998)

UOZUMI 等人：“基于大肠杆菌中的功能表达确定拟南芥 inuad 红化钾通道的跨膜拓扑”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

Kim et al.: "Akup1 : An Arabidopsis gene encoding high-affinity potassium transport activity" Plant Cell. 10(1). 51-62 (1998)

Kim 等人：“Akup1：编码高亲和力钾转运活性的拟南芥基因”Plant Cell。

DOI： --

发表时间：

期刊：

影响因子： --

作者：

[]

通讯作者：

塩害から種子形成を守るナトリウム輸送体の協奏的機構の探究

批准号：

24H00495
项目类别：

Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
资助金额：

$23.88万
财政年份：

2024
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University

Functional expression system for plant ion transport system in Escherichia. coli

批准号：

21K19060
项目类别：

Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
资助金额：

$4.08万
财政年份：

2021
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University

Study on the molecular mechanism of Ca signaling mediated by plant K channels

批准号：

20KK0127
项目类别：

Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
资助金额：

$11.9万
财政年份：

2020
负责人：

魚住信之
依托单位：

Tohoku University