蛋白質のハイブリッド化による成長因子受容体を標的とする細胞増殖阻害分子の構築

通过蛋白质杂交构建靶向生长因子受体的细胞生长抑制分子

• 批准号: 10145239
• 负责人: 山田 秀徳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10145239/
• 关键词: 標的細胞; ハイブリット蛋白質; 成長因子; RNase; 増殖阻害

標的細胞の選択的増殖阻害分子の構築を目的としてヒト塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)といくつかの消化酵素(ヒト膵臓RNase1,ウシRNaseA,ブタペプシノーゲン)を遺伝子上で融合,あるいは化学的に架橋したハイブリッド蛋白質を調製した。調製したRNase1-bFGF融合蛋白質及びRNaseA-bFGF架橋蛋白質は,約3μM及び約0.4μMの濃度でFGF受容体高発現マウス黒色腫B16/BL6細胞株の増殖を50%阻害(GI_<50>)したが,ペプシノーゲン-bFGF架橋蛋白質は顕著な増殖阻害効果を示さなかった。また,RNase1-bFGFはいくつかのヒト由来の培養ガン細胞に対してもμMのオーダーで増殖を阻害し,そのうち3種類の細胞ではFGF受容体の発現が報告されていた。FGF受容体を発現しない細胞に対しては増殖阻害効果は認められないことから,RNase1-bFGFあるいはRNaseA-bFGFの細胞成長阻害活性はFGF受容体を過剰発現する細胞に対して特異的であると結論した。RNaseA-bFGFとRNase1-bFGFを比較し,RNase1-FGFの機能を蛋白質工学的に強化するための方策を検討した。その結果,毒素ドメインであるRNase1を,プロテアーゼによって消化されにくくすること,細胞内のRNaseインヒビターによって阻害されにくくするこ,さらには粗面小胞体に効率的に集積するためのシグナル配列を導入し,蛋白合成の現場で効率的に働かせることが重要であることがわかった。

The aim of the construction of growth inhibitor molecules selected from target cells is to fuse basic fibroblast growth factor (bFGF) with digestive enzymes (e.g. RNase1, RNase A, anti-selection enzymes) on the gene, and to modulate the protein by chemical bridging. RNase1-bFGF fusion protein and RNase A-bFGF bridging protein were modulated at concentrations of about 3μM and 0.4μM to increase FGF receptor growth inhibition (GI_ ) of B16/BL6 cells<50>. In addition,RNase1-bFGF was found to inhibit the proliferation of uM in cultured cells, and the development of FGF receptors in all three cell types was reported. The cell growth inhibition activity of RNase 1-bFGF was found to be specific to the cell growth inhibition activity of FGF receptor. Comparing RNase A-bFGF with RNase1-bFGF, we discuss how to enhance RNase1-FGF function in protein engineering. As a result, RNase1, RNase1, RNase 2, RNase 3, RNase 4, RNase 5, RNase 6, RNase 7, RNase 8, RNase 9, RNase 9, RNase

项目成果

S.S.Terzyan: "The three dimensional structure of human RNase 4, unllganded and complexed with d(Up),reveals the basis for its uridine selectivity." Journal of Molecular Biology. 285・1. 205-214 (1999)

S.S.Terzyan：“未配体且与 d(Up) 复合的人类 RNase 4 的三维结构揭示了其尿苷选择性的基础。” 分子生物学杂志 285・1 (1999)。