マウス骨髄性白血病原因遺伝子Evi-9の同定とその解析

小鼠粒细胞白血病致病基因Evi-9的鉴定与分析

• 批准号: 10151253
• 负责人: 中村 卓郎
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151253/
• 关键词: Evi-9; BXH-2マウス; 骨髄性白血病; zinc finger; がん遺伝子; altemative splicing; insertional mutagenesis; BCL-6

Evi-9は、新規のマウス骨髄性白血病原因遺伝子である。この遺伝子は、最近我々が開発したCpG islandを利用してレトロウィルスの挿入部位を同定する方法によって発見されたが、本年度の研究ではEvi-9がコードする蛋白の機能解析を進め、以下の点を明らかにした。(1)Evi-9遺伝子は、C2H2 typeのsingleとdoubleのzinc finger domain各1個を有する未知の蛋白質をコードする。Alternative splicingの結果、それぞれ773、487、240アミノ酸からなる3種類のisoform、A、B、Cがコードされる。これらのisoformには、組織特異的発現パターンが認められた。Evi-9遺伝子が活性化している白血病細胞では全てのisoformの発現が認められた。(2)3種類のisoformをコードするcDNAをHeLa細胞に導入すると、double zinc finger domainを有するAとBのisoformは核内に、有さないisofom Cは細胞質に存在した。核内においてこれら2つのisoformは、nuclear body様のpanctuate patternの局在を示した。(3)Evi-9遺伝子は、BXH-2白血病のみならずM1、WEHI-3B、THP-1、U937、Rajiといったmyeloid,monocyte,Blymphocyte系の細胞株における発現が、Northern法にて確認された。(4)Evi-9蛋白の核内における特徴的な局在様式から、co-localizeする蛋白質の候補を検討すると、Evi-9はBCL-6とco-localizationを示していた。BXH-2白血病細胞では、Evi-9とBCL-6の共発現がしばしば認められたが、このような細胞やRaji細胞では、これら2種類の蛋白質のinteractionが免疫沈降-Western blotting法により確認された。(5)ヒトEvi-9遺伝子cDNA全長を単離したが、ヒトとマウスではアミノ酸レベルで99%以上のsequence identityがあり、高度に保存されている遺伝子であることが示唆された。

Evi-9 は, Shinju のマウスbone marrow leukemia cause legacy 伝子である. CpG islandをutilizationしてレトロウィルスのinsertion siteを同定するmethodによって発见されたが, This year's research included a functional analysis of the Evi-9 protein and the following key points. (1) Evi-9 single and double finger domain of Evi-9 each have 1 unknown protein. Alternative splicing の results, それぞれ773, 487, 240アミノ acid からなる 3 kinds of のisoform, A, B, C がコードされる.これらのisoformには、Tissue-specific 発appearパターンがcognizeめられた. Evi-9 is activated and the leukemia cells are completely isoformed and recognized. (2) There are three types of isoforms: cDNA is introduced into HeLa cells, double zinc finger domain is present in the nucleus, and isofom C is present in the cytoplasm. Nuclear bodyにおいてこれら2つのisoformは、nuclear body様のpanctuate patternのbureau inをshowした. (3)Evi-9 缝子は, BXH-2 leukemia のみならずM1, WEHI-3B, THP-1, U937, Raji といったm Cell lines of yeloid, monocyte, and Blymphocyte lines are now available and confirmed by Northern method. (4) The special features of Evi-9 protein's intranuclear structure are as follows: co-localization, co-localization, and co-localization of BCL-6. BXH-2 leukemia cells, Evi-9, and BCL-6 are all in common. Immunoprecipitation of 2 types of proteins in Raji cells: では and これらThe blotting method has been confirmed. (5) The full-length cDNA sequence of ヒトEvi-9 したが and ヒトとマウスではアミノ acid レベルで is more than 99% identityがあり, high degree of preservation, されている伝子であることがshows instigation, された.

项目成果

Nakamura,T., Yamazaki,Y., Hatano,Y., and Miura,L: "NUP98 is fused to PMX1 homeobox gene in human AML with chromosome translocation t(1 ; 11)(q23 ; p15)." Blood. in press. (1999)

Nakamura,T.、Yamazaki,Y.、Hatano,Y. 和 Miura,L：“NUP98 与人类 AML 中的 PMX1 同源框基因融合，并伴有染色体易位 t(1 ; 11)(q23 ; p15)。”