レトロウイルス挿入変異を用いた発がん分子機構の研究

利用逆转录病毒插入突变研究致癌分子机制

• 批准号: 04F04548
• 负责人: 中村 卓郎
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04548/
• 关键词: 急性骨髄性白血病; レトロウィルス挿入変異; 協調遺伝子

1)Meis1とHoxa9の両者をIRESを介して単一のレトロウィルスベクターに組み込んでマウス正常骨髄細胞に導入し、全身照射した同種マウスに移植した。Meis1/Hoxa9骨髄移植マウスは全例平均18週後にAMLが発症した。これらの腫瘍よりレトロウィルス挿入部位を同定し、この内6個が共通挿入部位であることが分かった。これらの共通挿入部位の近傍に存在する遺伝子Trib1、Evi1、Ahi1、Rarα、Pitpnb、AKO39950を同定した。この内Trib1、Evi1、Ahi1は何れもretrovirusの挿入によって発現の顕著な亢進が認められた。これらの遺伝子をMeis1/Hoxa9と共にマウス骨髄細胞に導入し協調作用を確認する実験を行った。Trib1、Evi1が加わることによって、Meis1/Hoxa9のみに比べより短い潜伏期間でAMLを誘導することが分かった。Trib1或いはEvi1とMeis1/Hoxa9を共に遺伝子導入したprimary骨髄細胞はMeis1/Hoxa9が導入した骨髄細胞に比べより顕著な増殖能を示し、replating assayでもcolonyの形成がより多く見られた。更に、Trib1とMeis1/Hoxa9が誘導したAMLの細胞株は、Meis1/Hoxa9 AML細胞株よりErkがより高度にリン酸化されていることが分かった。2)SV40 large Tを発現させたAPC欠損細胞株IMCEを用いて、MSCVの抗生物質選択マーカーを有するレトロウィルスベクターを感染させ、G418によりレトロウィルスが挿入された細胞を選択した。レトロウィルスに感染した細胞は軟寒天培地でのコロニー形成を確認した。これらのコロニーから52例の細胞株を樹立し、90ヶ所のレトロウィルス挿入部位を同定した。この内、一個が共通挿入部位であることが分かり、近傍に存在する遺伝子Akap9を同定した。

1) Meis1 と Hoxa9 の struck the を IRES を interface し て 単 a の レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー に group み 込 ん で マ ウ ス normal bone marrow cells に import し, total body irradiation し た same マ ウ ス に transplantation し た. The average 18 weeks after Meis1/Hoxa9 bone marrow transplantation is に ウス ウス, にAMLが, and <s:1> た. こ れ ら の swollen sores よ り レ ト ロ ウ ィ ル ス を scions into parts with し, こ の within six が scions into the common parts で あ る こ と が points か っ た. The common insertion site <e:1> of <s:1> れら <s:1> is adjacent to に, where する relics 伝 Trib1, Evi1, Ahi1, Rarα, Pitpnb, AKO39950を are determined to be <s:1> た. What こ の Trib1, Evi1, Ahi1 は れ も retrovirus の scions into に よ っ て 発 is の 顕 the な hyperthyroidism が recognize め ら れ た. こ れ ら の posthumous son 伝 を Meis1 / Hoxa9 と altogether に マ ウ ス bone marrow cells に import し coordinating role を confirm す る be 験 を line っ た. Trib1, Evi1 が plus わ る こ と に よ っ て, Meis1 / Hoxa9 の み に than べ よ り short latent period い で AML を induced す る こ と が points か っ た. Trib1 or い は Evi1 と Meis1 / Hoxa9 を altogether に posthumous son 伝 import し た primary bone marrow cells は Meis1 / Hoxa9 が import し た に bone marrow cells than べ よ り 顕 the な rights can yield を し, replating assay で も colony の form が よ り く see ら れ た. More に, Trib1 と Meis1 / Hoxa9 が induced し た AML の cell lines は, Meis1 / Hoxa9 AML cell lines よ り Erk が よ り highly に リ ン acidification さ れ て い る こ と が points か っ た. 2) of SV40 large T を 発 now さ せ た APC owe damaged cell lines IMCE を with い て, MSCV の antibiotic substances sentaku マ ー カ ー を have す る レ ト ロ ウ ィ ル ス ベ ク タ ー を infection さ せ, G418 に よ り レ ト ロ ウ ィ ル ス が scions into さ れ た cells を sentaku し た. Youdaoplaceholder0 スに スに infects the <s:1> た cells レトロウィ soft argentian で コロニ コロニ た to form を confirmation た. こ れ ら の コ ロ ニ ー か ら 52 cases の cell lines を し, 90 ヶ の レ ト ロ ウ ィ ル ス を scions into parts with fixed し た. Within the <s:1> <s:1>, a が common insert site である <s:1> とが is divided into, and nearby に exists the する derivative 伝 Akap9を, which is also determined to be た.