神経軸索誘導因子の分子的解析

神经轴突引导因素的分子分析

• 批准号: 10155209
• 负责人: 桝 正幸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10155209/
• 关键词: 神経回路形成; 軸索側枝; 軸索ガイダンス

神経結合の新生・再生などの動的過程を司る分子機構についてはあまり解析されていない。本研究では機能的シナプス形成の第一段階であり成熟脳の可塑性にも深い関わりがある軸索側枝誘導の機構を明らかにする事を目的とした。軸索側枝誘導については形態学的研究や細胞生物学的研究が多く行われて来たが、それを引き起こす分子的実体については不明であるので、本研究ではその分子的解析を目指した。本年度は軸索側枝誘導をアッセイする為の培養系の確立を行った。軸索側枝誘導は発生期の神経系において広く観察されるが、皮質橋路の形成における軸索側枝誘導については既に詳細な研究が米国のO′Learyのグループによって成されている。彼らによると、橋から分泌された拡散性分子が橋の近傍を通過した大脳皮質の遠心性神経軸索に作用し、この軸索から側枝を誘導すると言う。本研究では、コラーゲン・ゲルの三次元培養系を用いてこの追試を行った。新生児ラットの大脳皮質片をコラーゲン・ゲルに埋めて1〜2日培養すると培養片からコラーゲンの中へ軸索が伸長してくる。この時大脳皮質片と橋の組織片を共培養すると、大脳皮質片から伸び出してくる軸索は橋の方向に伸びると共にその一部に側枝を形成する傾向が見られた。しかしながら、多くの錯そうする軸索の中から軸索の側枝を見つける事は難しく、将来的にこのアッセイ系を発現クローニング法に用いる為にはより感度が高く、容易で、再現性があり、定量的に軸索側枝誘導を測定出来る方法が必要であり、本年度の成果をもとに更に検討を続ける予定である。これとともに分子生物学的に橋由来の分泌蛋白をコードする遺伝子をクローニングする方法の開発も行っている。具体的には酵母のinvertaseを用いたsignal trap法のベクターを改良し、橋mRNAをもとに橋cDNAライブラリーを作成した。準備が整えばスクリーニングを開始する予定である。

The process of the combination of Shinto and Buddhism, <s:1> rebirth and regeneration, な <s:1> the process of <s:1> movement, を the molecular structure of the る department, に the に て あま あま あま あま あま されて, and analysis, されて, な, and な. This study で は functionary シ ナ プ ス form the first Duan Jie の で あ り mature 脳 の plasticity に も deep い masato わ り が あ る axon induced lateral branch の institutions を Ming ら か に す る matter を purpose と し た. Axon induced lateral branch に つ い て や は morphology research in cell biology research が く line more わ れ て to た が, そ れ を lead き up こ す molecular be body に つ い て は unknown で あ る の で, this study で は そ の molecular analysis を refers し た. In the current year, をアッセ axonal lateral branch induction をアッセ する established を rows った for the <s:1> culture line <e:1>. Axon induced lateral branch は 発 stage の god 経 department に お い て hiroo く 観 examine さ れ る が, cortex bridge road の form に お け る axon induced lateral branch に つ い て は に both detailed study な が U.S. の O 'Leary の グ ル ー プ に よ っ て into さ れ て い る. 2 pet ら に よ る と, bridge か ら secretion さ れ た scattered の molecular が bridge near company, alongside を through し た big 脳 cortex の mind god 経 axon に し, こ の axon か ら collateral を induced す る と う. In this study, で った, コラ ゲ, ゲ, ゲ, and <s:1> are used in the three-dimensional culture of を to trace the を line った. New where ラ ッ ト の large 脳 cortex を コ ラ ー ゲ ン · ゲ ル に buried め て 1 ~ 2, cultivate す る と cultivate piece か ら コ ラ ー ゲ ン の へ in axon が elongation し て く る. こ の when large 脳 cortex と bridge の tissue slice を trained す る と, large 脳 cortex か ら stretch び out し て く る axon は bridge の direction に stretch び る と altogether に そ の a に collateral を form す る tendency が see ら れ た. し か し な が ら, multiple く の wrong そ う す る axon in の か ら axon の collateral を see つ け は skill to do difficult things る し く, future に こ の ア ッ セ イ department を 発 now ク ロ ー ニ ン に グ method with い る for に は よ が く, easy で り sensitivity and reproducibility が あ り, quantitative に axon induced lateral branch を determination method る が necessary で あ り, this year's の を も と に more Youdaoplaceholder0 asks を続ける to approve である. こ れ と と も に に bridge origin of the molecular biology is の secretory protein を コ ー ド す る posthumous son 伝 を ク ロ ー ニ ン グ す る method の open 発 も line っ て い る. Specific に は yeast の invertase を with い た signal trap method の ベ ク タ ー を improved し, bridge mRNA を も と に bridge cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を made し た. Prepare が whole えばス リ リ ニ ニ グを グを start する setting である.

项目成果

Tokita,Y.,et al.: "Characterization of excitatory amino acid neurotoxicity in N-methyl-D-aspartate receptor-deficient mouse cortical neuronal cells." European Journal of Neuroscience. 8. 69-78 (1996)

Tokita,Y.,et al.：“N-甲基-D-天冬氨酸受体缺陷型小鼠皮质神经元细胞中兴奋性氨基酸神经毒性的表征。”