マウスの新規な始原生殖細胞増殖因子TERFの単離,同定及び機能解析

一种新型小鼠原始生殖细胞生长因子TERF的分离、鉴定及功能分析

• 批准号: 10160209
• 负责人: 野口 基子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10160209/
• 关键词: マウス; 始原生殖細胞; 細胞増殖因子; ter遺伝子; コンデイションド メデイウム; アポトーシス; 生殖細胞培養; 生殖細胞欠損

マウスの始原生殖細胞(PGC)の欠損を引き起こすter(teratoma、Chr.18)突然変異遺伝子を持つterコンジェニック系統は、PGCの生存や増殖の分子的機構にかかわる新規の細胞増殖因子の存在を示唆した。即ち、+/+胎仔精巣の体細胞は、その細胞培養液(コンデイションドメデイウム、CM)中にPGCの生存を支持し、その結果PGCが増殖する成分を分泌し、ter体細胞のCMはPGCの生存を阻害した。本研究は、+/+胎仔精巣体細胞の産生するPGC増殖因子(TER Factor,TERFと命名)並びにter体細胞の欠陥因子を同定し、それらのコード遺伝子を単離し、PGCの発生におけるれらの因子の機能を明らかにすることを目標とした。terコンジェニック系のter/ter、+/terおよび+/+胚を用い、PGC培養系をアッセイ系として、CM中のTERFの同定を進め、体細胞膜とPGCの細胞膜を介して作用する膜結合型TERFが存在するか否か、またterPGC自体に欠陥があるかを、PGCと体細胞をter遺伝子型間で交換培養し解析した。1) 効果を確認するためCMを数系統の発生の数段階のPGC培養系に添加すると、+/terおよび+/+CMはPGCのDNA合成期及び細胞分裂期には関与しないが、PGCのアポトーシスを抑制しPGCは増殖した。terCMではいずれのPGCもアポトーシスをおこした。有効成分は、熱変性、凍結耐性、分子量30,000-100,000、無血清培地で失活した。更にクロマト等を組み合わせ、有効成分の単離と同定を進めた。2) 発生の数段階のterおよび+/+PGCを単離して、+/+体細胞と共培養すると、いずれのPGCも増殖したが、ter体細胞との共培養では、アポトーシスを起こした。このPGC欠損は、+/+CMを添加しても回復しなかった。よって、膜を介して作用する膜結合型TERFの存在と、terPGC自体は正常な生存能と増殖能があることがあることが確認された。

The primordial germ cell (PGC) of the primordial germ cell (PGC) is damaged and the primordial germ cell (PGC) is damaged and the teratoma is suddenly changed (teratoma, Chr.18).つter コンジェニック system は, PGC の survival and reproduction の molecular mechanism に か か わ る の cell proliferation factor の presence を instigation し た. That is, PGC in ち, +/+ fetal sperm somatic cells, そのcell culture medium (コンデイションドメデイウム, CM) Survival is supported, PGC is the result of proliferation and secretion of components, and somatic cell CM is the survival barrier of PGC. In this study, the PGC proliferation factor (TER) produced by +/+ fetal sperm cells was Factor, TERFとname) and somatic cell の owed 陥 factor を同定し、それらのコードの発生におけるれらのfactorのfunctionを明らかにすることをtargetとした. terコンジェニック线のter/ter, +/terおよび+/+embryo を用い, PGC culture system をアッセイ线として, CM中のTERFの同定を入め, somatic cell membrane とPGC The role of the cell membrane and the existence of the membrane-bound TERF, the existence of the TERF, the analysis of the exchange culture between PGC and somatic cells, and the analysis of the autologous PGC. 1)をConfirmation of effect するためCMを number system の発生のnumber stage のPGC culture system にadd すると、+/terおよび+/+CM The DNA synthesis phase of PGC and the cell division phase are closely related to each other, and the PGC DNA synthesis phase inhibits the proliferation of PGC. terCMではいずれのPGCもアポトーシスをおこした. Active ingredients, heat resistance, freezing resistance, molecular weight 30,000-100,000, serum-free and non-inactivated. Change the combination of にクロマト, を合わせ, and the active ingredients, の単利と同定を进めた. 2) The number of stages of 発生のterおよび+/+PGCを単利して、+/+somatic cell co-cultureすると、いずれのPGC もProliferation したが, ter somatic cells とのco-culture では, アポトーシスをrise こした.このPGC lacks は、+/+CMをadds してもReply しなかった.よって, membrane mediated action, membrane-bound TERF's existence, terPGC autologous normal survivability and reproductive ability, confirmation of terp's ability.