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自食作用系蛋白質分解に関わる細胞内調節因子の検索

寻找参与自噬蛋白降解的细胞内调节因子

基本信息

批准号：
10163214
负责人：
門脇基二
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、細胞内タンパク質の大部分を占める長寿命タンパク質の分解を担うオートファジー(自食作用)について、その調節に関わる未知の物質群を検索する試みである。本年度の研究計画に基づいて得られた成果は以下の通りである。(A) アミノ酸のシグナリング機構の解析:グルカゴンによりリン酸化されるタンパク質の検索は現在事情により中断している。そのかわり、オートファジーに対するアミノ酸の作用機構を探るべく、タンパク質合成に関わるPhosphatidylinositol3-ki naseやp70 S6 kinaseがオートファジーにも関わる可能性を探った。特異的阻害剤であるwortm anninやRapamycinを用いて検討した。その結果、アミノ酸のシグナリングには両者とも全く作用せず、自食胞の形成段階にWortm anninのみが作用することが判明した。別に、アミノ酸作用の情報伝達因子を探る試みとして、細菌毒素α-トキシンで作成した細胞膜透過性細胞をバイオアッセイ系として活性因子を検索した。活性因子は今回酢酸エチルでの溶媒抽出では塩基性画分にあることを示した。また、アミノ酸の作用点としてリソソームでの分解段階ではなく自食胞の形成段階が予想されているが、 ^<14>C-sucroseの自食胞画分への取り込み実験から、この活性画分がそこに作用することが示され、我々の探っている活性因子の妥当性を強く支持した。(B) 自食作用成熟段階に関わるGTP結合タンパク質について:本計画での中心である細菌毒素ストレプトリジンOの標品に問題が出てきたため、大きな支障が出ている。したがって、現在はバイオアッセイ系としてin vitro系である自食胞とリソソームの融合系の開発に重点を移している。幸い、融合反応のプローブとして細胞質酵素Betain homocystein methyltransferaseの限定分解系を利用できそうであり、本分野で初のin v itro系の成功が期待される。

In this study, most of the substances in the cell were accounted for, and the long-lived substances were involved in the decomposition of substances. This year's research plan is based on the following achievements: (A)The analysis of the mechanism of acid conversion: acid conversion, acid conversion, quality conversion, and current events The mechanism of action of phosphotidylinositol 3-kinase and p70 S6 kinase in the synthesis of phosphotidylinositol was explored. Special resistance is used to detect the presence of Rapamycin. As a result, the effect of acid on the formation of the cell was identified. To explore the information transmission factors of different kinds of bacteria, to explore the activity factors of bacterial toxin α-toxin in cell membrane permeability. The activity factor is present in the reaction medium and the solvent is extracted from the reaction medium. The decomposition stage of the active component of the active component is strongly supported by the prediction of the formation stage of the self-phagocytic cell, the selection of the active component of the active component and the detection of the <14>active factor. (B)The mature stage of autophagy is related to the GTP binding mechanism: the central problem of this project is that the bacterial toxin binding mechanism is related to the standard product. The focus of the development of the fusion system has shifted. Fortunately, the success of the limited decomposition system of the cytoplasmic enzyme Betain homocystein methyltransferase is expected.