GTP結合蛋白質による自食作用系蛋白質分解の制御

GTP 结合蛋白对自噬蛋白降解的调节

• 批准号: 08278210
• 负责人: 門脇 基二
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08278210/
• 关键词: 自食作用; 蛋白質分解; GTP結合蛋白質; ストレプトリジンO; N-エチルマレイミド; 肝臓

本研究では、自食作用の機構解明のため、細菌毒素ストレプトリジンO(SLO)によるセミインタクト肝細胞を作成した。この系は蛋白質などの高分子物質を自由に透過させる性質を持ち、自食作用については後半の成熟段階のみを保持していることが明らかにされた。この成熟段階はATPおよびサイトゾル依存性であり、非加水分解性GTP誘導体であるGTPγSによる阻害を受けることが判明した(J.B.C.,投稿中)。以上の結果に基づき、サイトゾル中に存在が予想されるGTP結合蛋白質(GTP-BP)をはじめとする成熟段階に関わる調節蛋白質の検索を開始した。まず、サイトゾルの硫安分画から始めたが、各画分の効果に再現性がなかった。これは各画分中に微量に混入するアンモニアによる蛋白質分解阻害効果と思われ、本実験には不適切と判明した。次いで、SDS-PAGEによりサイトゾル中には19.5,23.5,25.5,26.5,28kDaと少なくとも5本の^<32>P-GTP結合活性が検出された。生理活性を追跡するためゲル濾過(Toyopearl HW55-F)を行い、各画分の^<32>P-GTP結合活性とSLO細胞での蛋白質分解促進活性を検討したところ、分子量25-30kDaに両活性の一致するフラクションが得られた。現在、さらに陰イオン交換クロマトであるPOROS HQ/M,およびRESO URSE Qなどのカラムを用いて精製を進めている。また、いわゆる低分子量GTP-BPは数多くの同族体があるので、二次元電気泳動による精製のチェックを行っている。以上とは別に、この自食作用成熟段階には膜融合ステップが存在するが、サイトゾルをN-エチルマレイミド(NEM)処理することにより明らかに蛋白質分解促進作用が失われたので、小胞輸送などで報告されているNSF様の調節蛋白質が存在することが示され、現在その精製も進行中である。

In this study, the mechanism of autophagy and autophagy was used to explain that the liver cells were made from bacteria, bacteria and toxins (SLO). The system of protein and high molecular weight is free to be maintained through sexual stress and self-feeding in the second half of the mature phase. The mature section, ATP, and non-hydrolyzed GTP, GTP γ S, hindered the damage (J.B.C., in the contribution). As a result of the above results, it is expected that there is an GTP binding protein (GTP-BP) in the gene sequence. The mature segment is bound to bind to the protein chain. This is the first step of the thioampere painting, and the result of each painting is the first time. In each drawing score, "trace" is mixed with "protein" to break down and block the decomposition of the fruit. In this paper, we use the method of combining the activity of the five books ^ & lt;32>P-GTP to get the best results. In this paper, we use the method of combining the activity of the five books ^ & lt;32>P-GTP to produce the novel 19.5, 25.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 26.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5, 25.5 The physiological activity was determined by (Toyopearl HW55-F) assay, and the activity of SLO protein decomposition was enhanced by the combination of ^ and lt;32>P-GTP. The activity was consistent with the molecular weight of 25-30kDa. At present, we need to communicate with each other to improve the POROS HQ/M, and we need to use the information to improve the quality of the RESO URSE Q. Low molecular weight GTP-BP, low molecular weight, low molecular weight, low molecular weight The results show that there is a positive effect on the decomposition of protein in the mature stage of self-feeding, self-feeding, membrane fusion, protein fusion

项目成果

Lloyd,J.B.and Mason,R.W.: "Biology of the Lyso some" Plenum Press, 416 (1996)

Lloyd,J.B. 和 Mason,R.W.：“Lyso some 的生物学” Plenum Press，416 (1996)

Niioka,S.,et al.: "Separation of heterogenous lyso somes in isolated rat hepatocytes by modified Percoll density gradients." Bull.Fac.Agr.Niigata Univ.49(1). 49-58 (1996)

Niioka,S.,et al.：“通过改进的 Percoll 密度梯度分离分离的大鼠肝细胞中的异源溶酶体。”

Kadowaki,M.,et al.: "Acute effect of epinephrine on muscle proteolysis in perfused rat hind quarters." American Journal of Physiology. 270. E961-E967 (1996)

Kadowaki,M.,et al.：“肾上腺素对灌注大鼠后肢肌肉蛋白水解的急性作用。”

Suzuki,K.and Bond,J.S.: "Intracellular Protein Catabolism" Plenum Press, 306 (1996)

Suzuki,K. 和 Bond,J.S.：“细胞内蛋白质分解代谢”Plenum Press，306（1996）