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セミインタクト肝細胞によるタンパク質分解機構の解析

半完整肝细胞蛋白质降解机制分析

基本信息

批准号：
06806016
负责人：
門脇基二
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高等動物における細胞内タンパク質分解の分子的理解に向けて、申請者らはその主要経路と考えられる自食作用に焦点を絞り、その現象を再現するin vitro系の開発を目指している。これまで溶血毒素S.anreus α-トキシンを用いて細胞膜透過処理(permeabilization)したセミインタクト肝細胞を作り、第一段階である自食作用胞形成を含む自食作用系タンパク質分解(antophagic proteolysis)を再現することに成功した。しかしながら、α-トキシン処理細胞ではタンパク質など高分子の細胞内外での交換が不可能である。そこで、本研究課題ではさらに一歩進め、これを可能とするセミインタクト細胞を別の細菌毒素ストレプトリジン-O(SLO)を用いて作り上げることを目的とした。本年度得られた結果を以下に述べる。得られたSLO処理肝細胞はリソソームなどの無傷性が保たれ、細胞膜のみにタンパク質を透過させる穴があいていることが認められた。このSLO細胞でのタンパク質分解、つまりバリンの放出はATPとサイトゾルの添加により増加した。リソソーム機能を阻害するクロロキンが約60%阻害することから、明らかにリソソーム系タンパク質分解の存在が示されたが、第一段階の自食作用胞形成が起こらず、完全な自食作用が維持されていないことが示唆された。つまり、SLO処理の時点で形成されていた作用胞内のタンパク質が分解していると考えられた。興味深いことにGTP結合タンパク質の関与を示唆する阻害剤GTP_γS,GMP-PNPがATP,サイトゾルの共存下でのみこのタンパク質分解を阻害した。以上の結果は、SLO処理細胞は自食作用の第二段階以降、つまり自食作用胞の成熟過程を維持していることを示しており、α-トキシン細胞とは異なるin vitro系になりうることが判明した。本結果は第10回細胞内蛋白質分解に関する国際会議(東京)で発表した。

In higher animals, the molecular understanding of intracellular degradation is directed to the development of the vitro system by examining the main pathways of autophagy and reproducing phenomena. The first stage of autophagy cell formation, including autophagy proteolysis, was successfully reproduced by the cell membrane permeabilization of S.anreus α-toxin. It is impossible to exchange polymers inside and outside the cell when the cells are treated with α-nitrobenzene. This research topic is a step forward, and the purpose of this research is to develop a new type of bacterial toxin called SLO-O. The results for the year are described below. The results showed that SLO treatment of hepatocytes was effective in protecting liver cells from injury, and the membrane of hepatocytes was transparent. This SLO cell has a high level of ATP release and high levels of ATP addition. Since then, the existence of physical decomposition of the cloud-based system has been demonstrated, the formation of the first stage of cannibalistic cells has begun, and complete cannibalistic action has been maintained. When SLO is processed, it is formed. When SLO is processed, it is formed. When SLO is processed, it is decomposed. GTP binding agent GTP_γS,GMP-PNP binding agent GTP_γ S The above results show that SLO treated cells have reduced the second stage of cannibalism and maintained the maturation process of cannibalistic cells. It is clear that α-Tokushima cells are different in vitro systems. The results were presented at the 10th International Conference on Intracellular Protein Decomposition (Tokyo).