蛋白分解による細胞死制御機構の解析

蛋白质降解控制细胞死亡机制分析

基本信息

  • 批准号:
    10163225
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

アポトーシスの実行におけるCaspaseの重要性が示唆されおり、その基質蛋白質を同定することはアポトーシスを理解するために必須の課題である。我々はこれまでにCaspaseの未知の基質蛋白質を同定するためにyeast two-hybrid systemを利用したクローニング方法を確立した。本法ではCaspaseの2つのサブユニットを別々のプロモーター制御下において発現させ、小サブユニットをLexA DNA結合領域と融合させた。さらにyeast内での酵素一基質複合体の安定性を確保するために、基質蛋白質が分解されないように酵素の活性中心に点突然変異を導入した。以上のプラスミドをbaitとしてマウス胎児、及びヒト胸腺ライブラリーをスクリーニングし、その翻訳産物がin vitroで活性型Caspaseにより切断される幾つかのクローンを得た。これらの中にはゲルソリンをコードするcDNAを持つクローンが複数含まれており、活性型Caspase-3によってDXXD配列で切断された。ゲルソリンはカルシウム依存的にアクチン繊維に結合してアクチンの重合脱重合を調節することにより細胞の形態変化、運動性に関与するが、アポトーシス実行時にはCaspaseの切断によりカルシウム非依存的にアクチン繊維を切断し、細胞の形態変化の一端を担うと考えられる。また、ゲルソリンの過剰発現によりアポトーシスが抑制されるが、その機構の一つがCaspaseの活性化に先立って起こるミトコンドリアから細胞質へのチトクロームcの遊離の抑制にあることを明らかにした。
The importance of Caspase in the development of human beings is demonstrated by the fact that Caspase is an essential part of human development. We have established a two-hybrid system for the identification of unknown matrix proteins. This method can be used to control the development of Caspase 2, Caspase 3, Caspase 4, Caspase 5, Caspase 6, Caspase 7, Caspase 8, Caspase 9, Caspase 10, Caspase 11, Caspase 12, Caspase 13, Caspase 14, Caspase 15, Caspase 16, Caspase 17, Caspase 18, Caspase 19, C The stability of enzyme-matrix complexes in the past is ensured, and the active center of enzymes is suddenly changed. The above mentioned Caspase baits and proteins are isolated from the active Caspase in vitro. In this case, Caspase-3 is the active type of Caspase-3, and the cDNA sequence of Caspase-3 is the active type of Caspase-3 The regulation of cell morphology and mobility in the context of Caspase dependent, Caspase dependent. In this paper, the mechanism of Caspase activation is discussed. The mechanism of Caspase activation is discussed.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kamada et al: "A cloning method for caspase substrates that uses the yeast two-hybrid system:Cloning of the antiapoptotic gene gelsolin." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 95. 8532-8537 (1998)
Kamada 等人:“一种使用酵母双杂交系统的 caspase 底物克隆方法:抗凋亡基因凝溶胶蛋白的克隆。”
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  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
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  • 通讯作者:
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  • 资助金额:
    $ 1.28万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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知道了