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蛋白分解による細胞死制御機構の解析

蛋白质降解控制细胞死亡机制分析

基本信息

批准号：
11144223
负责人：
鎌田真司
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

アポトーシスの実行においてカスペースが重要な役割を果たしていることが明らかとなっている。我々はカスペースの未知の基質蛋白質を同定するためにyeast two-hybrid systemを利用したクローニング方法を確立した。本法ではカスペースの2つのサブユニットを別々のプロモーター制御下において発現させ、小サブユニットをLexA DNA結合領域と融合させた。さらにyeast内での酵素-基質複合体の安定性を確保するために、基質蛋白質が分解されないように酵素の活性中心に点突然変異を導入した。本法を用いてライブラリーをスクリーニングし、幾つかのカスペースの基質候補を同定した.まず、細胞骨格調節蛋白質であるゲルソリンがカスペースの基質であることを明らかにするとともに、ゲルソリンがミトコンドリアから細胞質へのチトクロームcの遊離を抑制することによってアポトーシスを抑制することを明らかにした。また、抗酸化作用を持つ酵素群の転写誘導に重要な役割を果たしている転写因子NRF2がカスペースの基質であり、カスペースによるNRF2の切断がアポトーシスの実行に重要な役割を果たすことを明かにした。一方、アポトーシス実行に特徴的な核の形態変化はカスペースによって引き起こされることが明らかとなっているが、活性化したカスペースが核へ移行するのか、或いはカスペースの基質が核へ移行するのか不明のままであった。我々は活性型カスペース-3を特異的に認識する抗体を作成することにより、アポトーシス実行時には活性型カスペース-3そのものが核へ移行することを明らかにした。現在核内に局在するカスペース-3の基質候補の解析を進めるとともに、核の形態変化との関係を明らかにする目的で研究を進めている。

It's important to keep your eyes open. We have established a two-hybrid system for identifying unknown matrix proteins. This method can be used to control the development of LexA DNA binding domain and fusion domain. The stability of enzyme-matrix complexes in the past is ensured, and matrix proteins are decomposed and the active centers of enzymes are suddenly introduced. This method is used to determine the matrix candidate of the matrix. The expression of cytoskeletal regulatory proteins in the cytoplasm of human beings is dependent on the expression of cytoskeletal regulatory proteins in the cytoplasm. In addition, the anti-acidification effect of NRF2 on the substrate of the enzyme group is important for the induction of the enzyme group. The morphology of the nucleus of a party, a party I am a member of the Committee on Human Rights. The present study on nuclear morphology is proceeding with the analysis of matrix candidates for nuclear morphology.