Regulation und Struktur-Funktionsanalyse der GAP-Domäne von Pseudomonas aeruginosa Exoenzym S

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）与klinisch相关，der zahlreiche proteinine producziert。真核生物zielzellgelangt和zielzello -病变中外泌酶S， das <s:1> ber einen type - iii - sekretionsweg (direkte Keim/Zielzelle- interakle) [j]。zytotoxisch wirkt。外显酶S ist双模aufgebaut和besitt c -末端ADPRibosyltransferase-Aktivität和n -末端eine GAP-Domäne， die zur Inaktivierung von Rho-GTPasen f<s:1> hrt。In dem beantragten Projekt soll die GAP-Aktivität von exexase S eingehend characterisierert werden。inbesonere ist geplant， die Rolle und Bedeutung der Auto-ADP-Ribosylierung von exo酶S f<e:1> r die Regulation der GAP-Aktivität zu untersuchen und die Aminosäuren zu identifizieren, die durch Auto-ADP-Ribosylierung modifiziert werden。Es sollen die Regionen von RHO-Proteinen dargestellt werden, die fgr die Substraterkennung der GAP-Aktivität von exoenzyme S essentiell sind。Weiterhin ist geplant, zu untersuchen， ob exo酶T， das strukturll exo酶S verwandt ist， jedoch kaum ADP-Ribosyltransferase-Aktivität besitzt， ebenfalls GA-Aktivität besitzt and gleichen调控sprinzipien unterliegt . wilch struction von Toxinchimären， die das肉毒杆菌c2 -毒素zur基haben， soll ein Keim-unabhängiger运输von exo酶S in Zielzellen ermöglicht werden。Schließlich wnd in Kooperation mit dem Labor von Oschkinat教授（柏林）die nmr - strukturanalysis von exoenzymatic S angestrebt。

Pseudomonas aeruginosa ist ein klinisch relevanter opportunistischer Keim, der zahlreiche Proteintoxine produziert. Zu diesen Toxinen gehört Exoenzym S, das über einen Typ-III-Sekretionsweg (direkte Keim/Zielzelle-Interaktion) in die eukaryote Zielzelle gelangt und dort zytopathisch bzw. zytotoxisch wirkt. Exoenzym S ist bimodular aufgebaut und besitzt C-terminal ADPRibosyltransferase-Aktivität und N-terminal eine GAP-Domäne, die zur Inaktivierung von Rho-GTPasen führt. In dem beantragten Projekt soll die GAP-Aktivität von Exoenzym S eingehend charakterisiert werden. Insbesondere ist geplant, die Rolle und Bedeutung der Auto-ADP-Ribosylierung von Exoenzym S für die Regulation der GAP-Aktivität zu untersuchen und die Aminosäuren zu identifizieren, die durch Auto-ADP-Ribosylierung modifiziert werden. Es sollen die Regionen von RHO-Proteinen dargestellt werden, die für die Substraterkennung der GAP-Aktivität von Exoenzym S essentiell sind. Weiterhin ist geplant, zu untersuchen, ob Exoenzym T, das strukturell Exoenzym S verwandt ist, jedoch kaum ADP-Ribosyltransferase-Aktivität besitzt, ebenfalls GA-Aktivität besitzt und gleichen Regulationsprinzipien unterliegt wie Exoenzym S. Durch Konstruktion von Toxinchimären, die das Clostridium botulinum C2-Toxin zur Basis haben, soll ein Keim-unabhängiger Transport von Exoenzym S in Zielzellen ermöglicht werden. Schließlich wird in Kooperation mit dem Labor von Prof. Oschkinat (Berlin) die NMR-Strukturanalyse von Exoenzym S angestrebt.