Regulation und Struktur-Funktionsanalyse der GAP-Domäne von Pseudomonas aeruginosa Exoenzym S

铜绿假单胞菌外切酶S GAP结构域的调控及结构功能分析

基本信息

  • 批准号:
    5285508
  • 负责人:
  • 金额:
    --
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    德国
  • 项目类别:
    Research Grants
  • 财政年份:
    2000
  • 资助国家:
    德国
  • 起止时间:
    1999-12-31 至 2003-12-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Pseudomonas aeruginosa ist ein klinisch relevanter opportunistischer Keim, der zahlreiche Proteintoxine produziert. Zu diesen Toxinen gehört Exoenzym S, das über einen Typ-III-Sekretionsweg (direkte Keim/Zielzelle-Interaktion) in die eukaryote Zielzelle gelangt und dort zytopathisch bzw. zytotoxisch wirkt. Exoenzym S ist bimodular aufgebaut und besitzt C-terminal ADPRibosyltransferase-Aktivität und N-terminal eine GAP-Domäne, die zur Inaktivierung von Rho-GTPasen führt. In dem beantragten Projekt soll die GAP-Aktivität von Exoenzym S eingehend charakterisiert werden. Insbesondere ist geplant, die Rolle und Bedeutung der Auto-ADP-Ribosylierung von Exoenzym S für die Regulation der GAP-Aktivität zu untersuchen und die Aminosäuren zu identifizieren, die durch Auto-ADP-Ribosylierung modifiziert werden. Es sollen die Regionen von RHO-Proteinen dargestellt werden, die für die Substraterkennung der GAP-Aktivität von Exoenzym S essentiell sind. Weiterhin ist geplant, zu untersuchen, ob Exoenzym T, das strukturell Exoenzym S verwandt ist, jedoch kaum ADP-Ribosyltransferase-Aktivität besitzt, ebenfalls GA-Aktivität besitzt und gleichen Regulationsprinzipien unterliegt wie Exoenzym S. Durch Konstruktion von Toxinchimären, die das Clostridium botulinum C2-Toxin zur Basis haben, soll ein Keim-unabhängiger Transport von Exoenzym S in Zielzellen ermöglicht werden. Schließlich wird in Kooperation mit dem Labor von Prof. Oschkinat (Berlin) die NMR-Strukturanalyse von Exoenzym S angestrebt.
铜绿假单胞菌是一种与生产蛋白中毒有关的机会主义菌。Exoenzyme S是一种在真核生物中存在的III型Sekretionsweg(直接Keim/Zielzelle相互作用)。细胞毒性Exoenzyme S是一种由两个模块组成的酶,C-末端ADP核糖基转移酶-激活和N-末端GAP-结构域,用于Rho-GTP酶的激活。在该项目中,酶促反应的GAP活性具有韦尔登特征。本研究旨在探讨Exoenzyme S对GAP活性的调节作用及其与Auto-ADP-Ribosylierung的关系,并通过Auto-ADP-Ribosylierung修饰韦尔登进行鉴定。Es sollen die Regionen von RHO-Proteinen dargestellt韦尔登,die für die Substraterkennung der GAP-Activität von Exoenzyme S essentiell sind.此外,Exoenzym T的结构也是Exoenzym S的结构之一,它可以使ADP-核糖基转移酶-活化,使GA-活化和调节与Exoenzym S类似。肉毒梭状芽孢杆菌C2-毒素在Zielzellen ermöglicht韦尔登中的不稳定转运。Schließlich将与Oschkinat教授(柏林)合作,对Exoenzyme S进行NMR结构分析。

项目成果

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