Charakterisierung der Bindung von Poly(A)-Bindungsprotein 2 an Poly(A) mittels Fluoreszenztitrationen: Abhängigkeit der Bindungsparameter von der Polymerlänge

使用荧光滴定表征 Poly(A) 结合蛋白 2 与 Poly(A) 的结合：结合参数对聚合物长度的依赖性

• 批准号: 5290936
• 负责人: Dr. Sylke Meyer
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biochemie und Biotechnologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1999-12-31 至 2001-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5290936?language=en
• 关键词: Charakterisierung; der; Bindung; von; Poly

Das Poly(A)-Bindungsprotein II (PABP2) aus Säugetieren spielt eine entscheidende Rolle bei der Längenkontrolle während der Synthese des Poly(A)-Schwanzes der mRNAs. In vitro-Versuche zeigen, daß der Kontrollmechanismus eine echte Messung der Poly(A)-Schwanzlänge beinhaltet. PABP2 bindet stöchiometrisch an Poly(A) mit einer Bedeckungs-länge von ca. 15 Adenylatresten. Elektronenmikroskopie und Scanning Force Mikroskopie haben ergeben, daß dabei sowohl lineare Filamente von 7 nm Durchmesser als auch kugelförmige Partikel von 21 nm Durchmesser gebildet werden. Die maximale Partikelgröße von 21 nm wird bei einer Poly(A)-Länge von 200-300 nt erreicht. Da diese Länge der von neu synthetisiertem Poly(A) in vivo und in vitro entspricht, wird angenommen, daß die beobachteten Partikel Bestandteil der Längenkontrolle sind. Ziel des beantragten Vorhabens ist es, die o.g. Befunde zur Partikelbildung mit einer unabhängigen Methode zu verifizieren: Die intrinsische Fluoreszenz des PABP2 wird durch Bindung an Poly(A) gelöscht. Über diese Fluoreszenzlöschung soll die Bindung charakterisiert und die Abhängigkeit der thermodynamischen Parameter (Kass, wkoop, n) von der Poly(A)-Länge bestimmt werden. Im Falle der Bildung eines definierten Partikels mit A250 würde man erwarten, daß sich mindestens einer der Parameter bei einer Länge von 250-300 nt signifikant ändert.

多聚（A）-结合蛋白II（PABP 2）在mRNA的合成过程中发挥了重要作用。在体外试验中，对Poly（A）-Schwanzlänge进行了控制机制的测定。PABP 2与Poly（A）结合，具有约1 mm的长度。15 Adenylatresten.电子显微镜和扫描力显微镜已经形成，但在7 nm的Durchmesser上有许多细丝，在21 nm的Durchmesser上也有许多韦尔登。21 nm的最大分光光度将在200-300 nm的Poly（A）-Länge上出现。体内和体外新合成的Poly（A）的这一段，将被广泛应用，但仍需进一步研究控制段的性能。这是一个很好的例子。在通过一种单一的验证方法进行部分培养之前：PABP 2的内部培养将通过结合Poly（A）gelöscht进行。该方法解决了Poly（A）-Länge bestimmt韦尔登的约束特性和参数（Kass，wkoop，n）的Abhängigkeit。Im Falle der Bildung eines definierten Partikels mit A250 würde man erwarten，daubersich mindestens einer der Parameter bei einer Länge von 250-300 nt signifikant ändert.