海洋性ビブリオ菌ナトリウムイオン特異的べん毛モータータンパク質の解析

海洋弧菌钠离子特异性鞭毛运动蛋白的分析

• 批准号: 10877048
• 负责人: 本間 道夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877048/
• 关键词: イオンチャネル; エネルギー変換; ビブリオ菌; べん毛; モーター; ナトリウム駆動力; イオンチャンネル

海洋性ビブリオ菌は極毛(Pof)と側毛(Laf)の二種類の鞭毛を環境に応じて産生する。液体培地中などの低粘性環境下では一本〜数本の極毛を発現し、寒天培地上などで極毛の運動が阻害されると、極毛に加えて高粘性でも運動できるように多数の側毛を発現する。そして、海洋性ビブリオ菌の極べん毛は、外膜から連なる鞘膜に被われた特徴的な形態を持つ。極毛の繊維は主に二種類のフラジェリン(PF47&PF45)から構成され、鞘膜には少なくとも二種類の膜タンパク質(PF60&PF18)が含まれている。また、長極べん毛変異株のべん毛構成タンパク質を調べたところ、フラジェリンの量比が変化し、鞘膜にPF60とPF18が多量に含まれていることが分かっている。今回、長極べん毛株よりPF60タンパク質を精製し、そのペプチド断片のアミノ酸配列を決定した。これをもとに、PF60をコードする遺伝子のクローニングに成功した。調製したべん毛分画をTriton-X100により処理し、超遠心で上清を回収し、PF60とPF18タンパク質を分画した。これらのN末端アミノ酸配列の決定を試みたが、N末端がブロックされているらしく成功しなかった。そこで、PF60タンパク質についてペプチダーゼによる分解でペプチド断片を分離し、3つについてN末端アミノ酸配列を決定した。これらの配列よりPCRプライマーを作成して反応を行ったところ、230bpの断片が増幅された。この断片クローン化して塩基配列を決定し、PF60の構造遺伝子由来であることを確認した。次に、この断片をプローブとして、ビブリオ染色体DNAライブラリーを導入した大腸菌に対するコロニーハイブリダイゼーションを行った。その結果、PF60をコードする遺伝子のクローン化に成功した。PF60遺伝子は、491アミノ酸よりなる推定分子量54KDaのタンパク質をコードし、N末端には、分泌に必要なシグナル配列がついていた。データベース検索の結果、有意なホモロジーのあるタンパク質は見つからなかった。一方、べん毛モーター遺伝子の制御を行っていると思われる遺伝子の変異体では、PF60の発現が行われなかった。

There are two kinds of flagellum, Pof, Laf, flagellum in the environment, and there are no bacteria in the environment. In the low viscosity environment of the liquid culture, in the low viscosity environment, in the cold weather, in the cold weather, in the high viscosity environment. The outer membrane, the outer membrane and the outer membrane. There are two types of thin films (PF60&PF18) that are sensitive to trichoderma (PF47&PF45) and that of the sheath (PF60&PF18). The amount of PF60 in the sheath is much higher than that in the sheath, and the sheath contains a lot of food. This time, the long-term hair plant, PF60 plant, the fine grain, the fragment, the acid column, the acid column. Please tell me that you are successful, and that you won't win. PF60 won't make a success. The hair is divided into two parts: Triton-X100, supernatant, PF60, PF18 and so on. The N-terminal acid configuration determines that the N-terminal configuration is successful and that the N-terminal configuration is successful. The fragments are separated, the fragments are separated, and the acid column is arranged at the end of the N-terminal. The acid column is divided into two parts. "PCR" is arranged in a row, and the 230bp fragment is made into an inverse line. This is the reason why the basic configuration column is determined, and PF60 is used to confirm the origin of the column. In the second time, the fragments were broken, the chromosomes were DNA, the chromosomes were broken, and the chromosomes were transferred into the bacteria. The results showed that PF60 was successful and the child was successful. The molecular weight of PF60 was estimated by the molecular weight of 54KDa, N-terminal, N-terminal, essential amino acid, amino acid, acid, molecular weight, molecular weight and molecular weight. Please contact me for the results. I would like to know if you want to know how to get the results. On the one hand, you can make sure that you are in control of the line. You may want to know that your body is in good shape, and PF60 will see that you are in a position to do so.

项目成果

Furuno,M: "Suppression by the DNA fratgment of the motX promoter region on long flagellar mutants of Vibrio alginolitycus" Microbiol.Immunol. 43(1). 39-43 (1999)

Furuno,M：“motX 启动子区域的 DNA 片段对藻酸弧菌长鞭毛突变体的抑制”Microbiol.Immunol。