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スフィンゴ脂質情報伝達系による新規の血管機能制御機構に関する分子細胞生理学的研究

鞘脂信号转导系统新型血管功能控制机制的分子和细胞生理研究

基本信息

批准号：
10877110
负责人：
最上紀美子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

in situ内皮細胞の生理機能におけるスフィンゴミエリナーゼの役割について検討した。1. ウシ大動脈弁in situ内皮細胞の細胞質Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)に対する作用を調べるため、蛍光試薬fura-2を用いた[Ca^<2+>]i測定を行った。sphingomyelinase(0.05U/ml)は[Ca^<2+>]iに影響を与えなかった。2. ウシ大動脈弁in situ内皮細胞のNO産生に対する作用を調べるため、2,3-diaminonaphthalene法を用いたNO測定を行った。sphingomyelinase(0.05U/ml)はNO産生を有為に増加させた(P<0.05)。3. ウシ大動脈弁in situ内皮細胞におけるeNOSおよびiNOSの発現を調べるため、抗eNOS抗体および抗iNOS抗体を用いてwestern blottingを行った。ウシ大動脈弁in situ内皮細胞にはeNOSの発現は認められたが、iNOSの発現は認められなかった。4. 内皮依存性の弛緩に対する関与を検討するため、予めU-46619で収縮させたウシ冠動脈標本の血管張力に対する作用を調べた。内皮付の標本にsphingomyelinase(0.05U/ml)を作用させると、著しい弛緩がみられ、さらにNO合成阻害剤であるLNMMAを加えると弛緩が抑制された。sphingomyelinaseによる血管弛緩作用は、内皮を除去した標本では認められなかった。以上のことから、スフィンゴミエリナーゼはin situ内皮細胞においてカルシウム非依存性にNO産生を増加させ、内皮依存性血管弛緩反応を引き起こすことが明らかとなった。また、そのNO産生はeNOSによるものと考えられた。血管内皮細胞の生理機能を制御する新規の因子としてスフィンゴミエリナーゼが重要である可能性が示唆された。

The physiological function of endothelial cells in situ 1. Cytoplasmic Ca^<2+> concentration ([Ca ^<2 +>]i) in vascular endothelial cells was measured by fluorescence assay. sphingomyelinase(0.05U/ml)[Ca^<2+>]i 2. The regulation of NO production in vascular endothelial cells was studied by 2,3-diaminonthalene assay. NO production increased significantly with sphingomyelinase(0.05U/ml)(P<0.05). 3. The expression of eNOS and iNOS in endothelial cells is regulated by anti-eNOS antibodies and anti-iNOS antibodies. The endothelial cells in the aorta are responsible for the development of eNOS. 4. Endothelium-dependent relaxation is related to vascular tension, which is regulated by U-46619. Endothelium-bound sphingomyelinase(0.05U/ml) acts as an inhibitor of NO synthesis and as an inhibitor of NO synthesis. Sphingomyelinase is a vasodilator that removes endothelial cells. The above mentioned NO production in situ endothelial cells is increased independently, and endothelium-dependent vascular relaxation is induced. No, NO, no. The new regulation factors of vascular endothelial cell physiological function may be important to the development of vascular endothelial cells.