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脈絡上皮細胞の培養細胞株の樹立

脉络膜上皮细胞培养细胞系的建立

基本信息

批准号：
10877386
负责人：
寺崎哲也
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックラットの脈絡叢より脈絡叢上皮細胞をトリプシンEDTA処理により採取し、10%FBS含有DMEM培地にて5%CO_2雰囲気下33度で培養した。増殖の速い細胞株について2回コロニー形成を行い、ペニシリンカップを用いて単一細胞由来の細胞株(TR-CSFB)5株を単離した。これらTR-CSFBは上皮細胞特有の敷石状の形状を示し、Western blot法によりSV40T抗原の発現が明らかとなった。TR-CSFBは35から40時間のdoubling timeで増殖し、50代の継代においても細胞の形状に大きな変化はなかった。脈絡叢上皮細胞に発現が報告されているtransthyretinがTR-CSFBでも発現していることが免疫染色法により明らかになり、脈絡叢上皮細胞の刷子縁膜での局在が報告されているNa^+,K^+-ATPaseがTR-CSFBの頂側膜側に局在していることが共焦点レーザー顕微鏡により明らかとなり、単離した細胞株は脈絡叢上皮細胞であることが示された。さらに、脈絡叢上皮細胞はL-prolineを輸送するsystem Aが機能していることが知られているが、TR-CSFBにおいては[^3H]-L-prolineの細胞内取り込み量は少なくとも30分間は直線性を示し、Na^+依存性、ouabain感受性及び濃度依存性を示した。Michaelis定数は1.5mM、最大取り込み速度は2.4nmol/(min-mg protein)であった。このL-prolineの取り込みはsestem Aの特異的基質であるα-methylaminoisobutylic acidにより約80%阻害された。従って、本法によって増殖可能でsystem AによりL-prolineを取り込む輸送機能を有した脈絡叢上皮細胞株が樹立できた。

Choroid plexus epithelial cells were cultured in 10% FBS medium containing DMEM at 33 ℃ under 5% CO_2 atmosphere. 5 strains isolated from a single cell-derived cell line (TR-CSFB) The expression of SV40T antigen was detected by Western blot. TR-CSFB is a 35 - 40 doubling time plant, 50 - 50 doubling time plant. Transthyretin was detected in TR-CSFB cells by immunostaining and Na^+,K^+-ATPase was detected in TR-CSFB cells by confocal microscopy. The L-proline transport system A functions as a transport pathway for choroid plexus epithelial cells, and TR-CSFB functions as a transport pathway for L-proline transport. The intracellular uptake of L-proline in choroid plexus epithelial cells decreases. The linearity, Na + dependence, ouabain sensitivity, and concentration dependence of TR-CSFB cells are shown in 30 minutes. Michaelis constant is 1.5mM, maximum velocity is 2.4nmol/(min-mg protein). The L-proline is selected from the matrix A and the α-methylaminoisobutyric acid is selected from the matrix A. The inhibition rate is about 80%. This method can be used to establish choroid plexus epithelial cell lines.