权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

コンビケムを用いた糖鎖認識ペプチドリガンドの取得

使用 Combichem 获得碳水化合物链识别肽配体

基本信息

批准号：
11132242
负责人：
福崎英一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)糖鎖を認識するペプチド配列のスクリーニング多糖(キチン,セルロース)を標的として、M13ファージランダムペプチドライブラリーを探索源として、カラム法および、磁気ビーズ法を用いてスクリーニングを行った。結果として、chito-agaroseカラムをマトリクスにして、水素結合を強調する条件(60%EtOH)で洗浄後、水素結合を弱める条件(高濃度糖、高濃度多価アルコール)で溶出を試みたが、数ラウンド後に急激な回収率の低下が認められた。また、cellulose磁気ビーズをマトリクスにして、上記と同様の洗浄・溶出条件でセレクションを行ったが、同様に数ラウンド後に回収率が低下した。上記の磁気ビーズセレクションと同様の吸着・洗浄の後にフェノールによる強制溶出を行うセレクションを行い、4ラウンド後にシークエンス解析を行ったところ、グリシン出現頻度の低下およびプロリン出現頻度の上昇が観測された。磁気ビーズを直接感染させてファージ増幅率を調べたところ、3時間感染と5時間感染との間で顕著な違いが無かった。それらの結果から、中性糖の認識能とM13ファージ感染能との間に負の相関が示唆された。2)糖鎖を認識DNAアプタマ-の取得59残其のランダムDNAライブラリーからインビトロセレクション法により取得したキチンを認識するDNAアプタマ-の選択性を評価し、下記の仮説を得た。DNAアプタマ-が多糖を認識するには、バルジループあるいは、ステムループ等のループ構造が必須である。(G-カルテット構造ではない。)類似多糖類に対する選択性は、ループの数が3個以上の場合高くなる。ループ数が1の場合は、糖に対する親和性は認められるが基質認識能は低い。

1) Sugar lock recognition polysaccharide, M13 polysaccharide, M13ンダムペプチドライブラリーをExploration source として、カラム法および, Magnetic 気ビーズ法を用いてスクリーニングを行った. Result: として, chito-agarose カラムをマトリクスにして, water binding を emphasized する condition (60% EtOH), after washing, water The protein binding conditions are weak (high concentration of sugar, high concentration of polyethylene glycol), and the dissolution test is carried out, and the recovery rate is low due to rapid stimulation after a few sterilizations. Washing・The dissolution conditions are as follows: the recovery rate is low due to the same dissolution conditions and the same dissolution conditions. The above mentioned magnets are absorbed and cleaned after cleaning.フェノールによるforced dissolution を行うセレクションを行い、4ラウンド后にシークエンスanalytic を行ったところ、グリシン出The frequency of occurrence is low, and the frequency of occurrence is rising. Magnetic 気ビーズをdirect infection させてファージamplitude rate を Adjustment べたところ, 3 time infection and 5 time infection との间で顕出なviolation いが无かった.それらのRESULTS から、neutral sugar のcognition energy とM13ファージinfection energy との间にnegative の correlation がshow instigation された. 2) Sugar lock を recognize DNA アプタマ-のGet 59 residual its のランダムDNAライブラリーからインビトロセレクション法によりGET したキチンをKnowledge するDNAアプタマ-の选択性を Comment価し、下注の仮说をgetた. DNA アプタマ-がpolysaccharide するには, バルジループあるいは, ステムループ and other のループ structures are necessary. (G-カルテットstructural structure.) Similar to the polysaccharide type, choose the high quality when there are more than 3 or more polysaccharides.ループnumberが1のoccasionは、sugarに対するaffinityはcognitionめられるが matrix recognition ability is lowい.