肝特異的転写因子による肝臓幹様細胞(oval cell)の増殖・分化の制御機構

肝脏特异性转录因子调控肝干样细胞（卵圆细胞）增殖和分化的机制

• 批准号: 11139206
• 负责人: 杉山 俊博
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139206/
• 关键词: 肝特異的転写因子; 肝臓幹様細胞; oval cell; HNF-1; レチノイン酸; EGF

要約肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。結果1)SD-SLCにHNF-1遺伝子導入して9株の永久株を樹立できた。一方、oval cellは導入後の増殖が悪いために現在のところ永久株は確立できなかった。そこで、本実験では樹立化に成功した3種のSD-SLC/HNF-1株を用いた。2)SD-SLC/HNF-1は2次元細胞培養系でレチノイン酸を添加すると、アルブミン、AFP、HNF-4、γGTPのmRNA発現を減少させたが、一方C/EBPを増加させた。SD-SLC/HNF-1に対するEGFの効果は濃度依存性にアルブミンの発現を抑制した。ところが、コントロールSD-SLCに対してはEGFは最適濃度では発現増加を示した。3)コラーゲンコート上(1次元培養系)でSD-SLC/HNF-1、SD-SLC/vectorのみ、SD-SLCの3種の細胞株を培養したとき、この順番でアルブミンが強く発現した。考察我々の樹立した細胞と従来報告されたoval cellと相違する点は、培養初期からアルブミン合成能がないことや肝細胞転写因子のうちHNF-3βしか発現していないことである。肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子(HNF-1)をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。このことは、これらの因子は肝臓幹様細胞を脱分化する働きがあると考えられた。

Offer liver specific planning write factor を ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し て ア ル ブ ミ ン を 発 now す る こ と が out る か ど う か, in vitro で beg し 検 た. そ の results, liver specific planning write factor を ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た viscera do others in liver cells SD - SLC / は HNF - 1, コ ラ ー ゲ ン の 2 dimensional culture system で は ア ル ブ ミ ン を synthetic で き る よ う に な る が, こ こ に レ チ ノ イ ン acid や EGF を add す る と ア ル ブ ミ ン synthetic は inhibit さ れ た. Result 1)SD-SLCにHNF-1 remains 伝 inoculate <s:1> て9 <s:1> permanent strains を establish で た た た た One side, oval cells after <s:1> introduction <s:1> proliferation が悪 が悪 ために now <s:1> と ろ ろ permanent strain <e:1> established で な な な な った った った った. Youdaoplaceholder0 を で で, this experiment で で successfully established に and <s:1> た three types of SD-SLC/HNF-1 strains を using を た. 2) SD - SLC は 2 yuan/HNF - 1 cell culture system で レ チ ノ イ ン acid を add す る と, ア ル ブ ミ ン, AFP, HNF - 4, gamma GTP の made mRNA 発 を now reduce さ せ た が, party C/EBP を raised plus さ せ た. SD-SLC/HNF-1に exerts a を inhibition <s:1> た た on the <s:1> concentration dependence of するEGF <s:1> effect にア ブ ブ ブ <s:1> <e:1>. と こ ろ が, コ ン ト ロ ー ル SD - SLC に し seaborne て は the optimal concentration of EGF は で は 発 now rights を shown し た. 3) コ ラ ー ゲ ン コ ー ト (1 yuan culture) on で SD - SLC, SD/HNF - 1 - SLC/vector の み, SD - SLC の three の cell lines を cultivate し た と き, こ の shun's で ア ル ブ ミ ン が strong く 発 now し た. On my 々 の set し た cells と 従 to report さ れ た oval cell と conceives す る point early は, cultivating か ら ア ル ブ ミ ン synthesis can が な い こ と や liver cell planning write factor の う ち HNF - 3 beta し か 発 now し て い な い こ と で あ る. Liver specific planning write factor を ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し て ア ル ブ ミ ン を 発 now す る こ と が out る か ど う か, in vitro で beg し 検 た. そ の results, liver specific planning factor (HNF - 1) written を ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た viscera do others in liver cells SD - SLC / は HNF - 1, コ ラ ー ゲ ン の 2 dimensional culture system で は ア ル ブ ミ ン を synthetic で き る よ う に な る が, こ こ に レ チ ノ イ ン acid や EGF を add す る と ア ル ブ ミ ン synthetic は inhibit さ れ た. <s:1> と と, れら <s:1> factor を hepatic stem-like cell を dedifferentiation する <s:1> があると があると examination えられた.

项目成果

Harada M.et al.: "Wilson's disease gene product,ATP7B,localizes in the late endosomes in a human hepatoma cell line and normal rat hepatocytes : Participation in biliary copper"Gastroenterology. (in press). (2000)

Harada M.等人：“威尔逊病基因产物，ATP7B，定位于人肝癌细胞系和正常大鼠肝细胞的晚期内体中：参与胆铜”胃肠病学。

Sugiyama,T.et al.: "Liver stem-like(oval)cells : isolation,differentiation and application for cell therapy. In ikada,Y.and Okano,T.ed. Tissue Engineering for Therapeutic USE"Elsevier Science B.V.. pp.161 (1999)

Sugiyama,T.et al.：“肝脏干细胞样（卵形）细胞：分离、分化和细胞治疗应用。Inikada,Y.and Okano,T.ed.Tissue Engineering for Therapeutic USE”Elsevier Science B.V.. pp

Komatsu M.et al.: "Cisplatin resistance conferred by copper transporting P-type ATPase cDNA (ATP7B)"Cancer Res.. (in press). (2000)

Komatsu M.等人：“铜转运 P 型 ATP 酶 cDNA (ATP7B) 赋予的顺铂抗性”Cancer Res..（正在出版）。

Terada K, et al.: "Biliary expression of copper in LEC rat after introduction of copper transporting P-type ATPase,ATP7B"FEBS Lett.. 448. 53-56 (1999)

Terada K 等人：“引入铜转运 P 型 ATP 酶，ATP7B 后 LEC 大鼠中铜的胆汁表达”FEBS Lett.. 448. 53-56 (1999)

Terada K, et al.: "The Long-Evans Cinnamon rat: An animal model for Wilson's disease"Pediatr.Int.. 41. 414-418 (1999)

Terada K 等人：“Long-Evans Cinnamon 大鼠：威尔逊病的动物模型”Pediatr.Int.. 41. 414-418 (1999)