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サイクリン依存性キナーゼ阻害分子p27の分解因子の同定及び解析

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂分子p27降解因子的鉴定及分析

基本信息

批准号：
11144228
负责人：
小南欽一郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144228/
关键词：
酵母 p27 Rum1 タンパク分解ユビキチン SCF

项目摘要

CDK阻害分子p27の分解には、ユビキチン-プロテアソーム系の関与が示されているが、どのような分子がそのユビキチン化の特異性を決定するか明らかにされていない。そこで本研究では、p27/Rum1(酵母におけるP27の機能的ホモログ)の分解に関与する因子を取得する目的で、pop1変異株を含む酵母を用いた遺伝学的方法によりそれらの遺伝子群の同定を試みた。1.p27の分解因子の取得(1)p27をpop1+変異株中で高発現すると致死の表現型を示すことを見いだした。(2)酵母で発現するマウス胸腺由来のcDNAライブラリーを作成した。(3)p27高発現による致死性を抑圧する遺伝子を(2)のcDNAライブラリーより8クローン取得した。(4)これらには遺伝子発現の抑圧活性が無いことを確かめた。(5)これらには、ユビキチン遺伝子、60SリボソームL23遺伝子、さらに6つの未知の遺伝子が含まれていた。(6)現在、それらのp27に対するin vivoでの直接的影響を解析中である。2.Rum1分解に関わる変異株および阻害因子の取得(1)rum1+遺伝子とオーレオバシジン耐性遺伝子を融合させることにより、酵母内でのRum1タンパク質の安定性検出用モニターシステムを構築した。(2)上記遺伝子を発現している酵母細胞を変異源処理し、11株のRum1安定性に関わる変異株を取得した。(3)これらの変異株から現在までに6クローン取得し、トランスポゾンシステムにより対応する遺伝子を特定中である。(4)Rum1分解の阻害分子として、SUMO1に対するE2として知られているHus5、SCF複合体のSkp1に結合する分子Sgt1、その他未知の分子4つが取得された。(5)現在これらと、Rum1のユビキチン化に関わるSCF複合体との関係を、遺伝学的生化学的に検討中である。

The decomposition of CDK inhibitor p27 determines the specificity of CDK inhibitor p27 in relation to CDK inhibitor p27 protein system. In this study, we tried to obtain the relevant factors for the decomposition of p27/Rum1 (yeast P27 functional matrix), and to obtain the identity of P27/Rum1 mutants using genetic methods. 1. Acquisition of p27 decomposition factors (1)p27 pop1 + high expression in mutant plants and expression of lethal phenotypes (2)Yeast gene expression is derived from cDNA. (3)p27 high expression, lethal suppression, gene expression,(2) cDNA amplification, (4)The activity of suppression is not detected. (5)This is the first time that a person'S name has been used. (6)Now, the direct effects of p27 in vivo are analyzed. 2. The acquisition of different mutants and resistance factors related to Rum1 decomposition (1) Rum1 + gene and resistance gene fusion (2) Rum1 + gene fusion (3) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (3) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (3) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (3) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (5) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (5) Rum1 + gene fusion (4) Rum1 + gene fusion (5) Rum1 + gene fusion (6) Rum1 + gene fusion (7) Rum1 + gene fusion (6) Rum1 + gene fusion (7) Rum1 + gene fusion (2)In addition, 11 strains of Rum1 were isolated from yeast cells after heterologous treatment. (3)This is the first time that a plant has been identified. (4)Rum1 decomposition inhibitor molecules, SUMO1 related molecules, E2 related molecules, Hus5 related molecules, SCF complex Skp1 related molecules, Sgt1 related molecules, and other unknown molecules 4 related molecules were obtained. (5)Now, the relationship between SCF complex and Rum1 is discussed.