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A novel regulatory mechanism of the function of tumor suppressor p27 by a nucleolar protein NPM1.

核仁蛋白 NPM1 调节肿瘤抑制因子 p27 功能的新机制。

基本信息

批准号：
21K05510
负责人：
千葉櫻拓
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

NPM1によるp27機能抑圧機構：前年度にNPM1のp27相互作用部位として３箇所のアミノ酸残基が示唆されたため、当該箇所の置換変異体とp27との動物細胞内相互作用を免疫沈降法により解析した結果、内在性NPM1発現下では外来性NPM1-p27相互作用が検出されず、内在性NPM1発現抑制下で変異体の相互作用低下が示された。NPM1は細胞内の液-液相分離に関与することから、p27との相互作用も液-液相分離を介しており、細胞破砕液中では検出されにくいと考えられた。また、NPM1抑制因子ARFとp27機能との相関性を検証するため、ARF遺伝子の破壊および外来性導入を試みたが、前者はARF遺伝子領域の別遺伝子との重複、後者はARFの増殖抑制機能のため実現困難であった。p53によるp27安定化機構およびp27発現とがん細胞表現型との相関性：前年度より、p53欠損によるp27タンパク質分解の促進、足場非依存条件下でのp53依存的なp27によるがん細胞増殖抑制が示唆されたため、p27の新規制御機構として重要と考え、積極的に研究を推進した。まず、p53はp27のポリユビキチン化非依存・プロテアソーム依存的分解を抑制することが示唆された。次に、p27の10番目セリン残基（S10）または187番目スレオニン残基（T187）の非リン酸化型変異により、p53欠損下でのp27分解が抑圧された。S10およびT187のリン酸化は各々異なるポリユビキチン化経路を誘導するが、p53に抑制されるp27分解系はこれらと同じシグナルに依存する未知の機構であることが示唆された。p27とがん細胞表現型の相関については、創傷治癒アッセイにより遊走能を、トランスウェルアッセイにより浸潤能を検証した結果、両表現型ともp27の誘導発現により抑制された。また、マウスがん異種移植系においてp27の誘導発現により転移が抑制された。

NPM1によるp27 functional pressure-suppressing mechanism: Previous year's NPM1のp27 interaction part として３箇All the amino acid residues are shown as されたため, and when the のアミノ acid residues are substituted, they interact with each other in animal cells. The results of analysis by immunosedimentation method, the detection of exogenous NPM1-p27 interaction under intrinsic NPM1 expression, and the reduction of allogeneic interaction under inhibition of intrinsic NPM1 expression are shown. NPM1 is involved in the intracellular liquid-liquid phase separation and the interaction between NPM1 and p27 Liquid-liquid phase separation is done, and the cells are broken down into the liquid.また、NPM1 inhibitor ARFとp27 function and correlation を検证するため、ARF legacy 伝子の壊およびexogenous introductionをThe former is a duplication of the ARF's proliferative inhibitory function, and the former is a duplication of the ARF's proliferative inhibitory function. p53 によるp27 stabilization mechanism およびp27 発appears とがんcell phenotype とのCorrelation: より of the previous year, p53 loss によるp27 タンパクpromoting of mass decomposition, foot field non- The p53-dependent cell proliferation inhibition of p27 under the condition of p53 is an indication that the new regulatory mechanism of p27 is important and is being actively studied and promoted.まず、p53はp27のポリユビキチン化 Non-dependency·プロテアソームDependence decomposition をSuppression することが Show 唆された. S10, p27's 10th grade セリン residue (S10) and p27's 187th grade スレオニン residue ( T187) is a non-リン-acidified type of polyester, which suppresses the decomposition of p27 under the loss of p53. S10 およびT187 のリン acidification は々isoなるポリユビキチン化経路をinducing するが, p53 に inhibit The されるp27 decomposition system is the same as the じシグナルにdepends on the unknown mechanism and the であることがshows the instigation of された. p27とがん cell phenotype related については, wound healing アッセイにより游行能を, トランスウェThe results of ルアッセイにより infiltration can be confirmed, and the phenotype of ともp27 is induced and the により is suppressed.また, マウスがんxenograft system においてp27のinducing hair is now により転moving and suppressing された.