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アカパンカビのDNA除去修復機構の解明

粗糙脉孢菌 DNA 去除和修复机制的阐明

基本信息

批准号：
11146202
负责人：
井上弘一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11146202/
关键词：
フラップエンドヌクレアーゼ RIP アカパンカビ DNA修復

项目摘要

アカパンカビのflap endonucleaseホモログ遺伝子は、394アミノ酸からなる分子量45kDのタンパク質をコードしており、1,185baseのORFからなり、途中3つのイントロンによって寸断されている。この遺伝子はRFLPマッピングの結果、第VII連鎖群に存在するが詳細なマップは不明である。アカパンカビにおけるこの遺伝子の機能を知るためRIP(repeat induced point mutation)による遺伝子破壊を試みた。遺伝子破壊操作の後、子孫株の変異原感受性試験、温度感受性試験を試みたが感受性株は得られなかった。また、子孫株のゲノムDNAを抽出し制限酵素で切断し、泳動の後、サザンハイブリダイゼイションを行い、flap遺伝子の制限酵素部位に変異が生じているかどうかを調べたところ、変異を確認できなかった。二つの可能性が考えられた。すなわち(1)アカパンカビのflap遺伝子はessentialであるため、この遺伝子に変異を持つ株は回収できない。(2)この遺伝子はRIP抵抗性で、RIPによる遺伝子破壊はできない/できにくいDNA構造になっている。そこでessentialかどうかを見るために、flap遺伝子のアンチセンス遺伝子を作製し、これを細胞内で発現させ、本来の遺伝子の働きを停止させる実験を行った。また、シャドウRIPと呼ばれる方法でessentialか否かの確認実験を行った。DNA構造に関しては、種々の制限酵素による切断実験を行ったが、やはり構造に特徴があることが示唆された。

The content of 45kD is determined according to the ORF of 1,185base. The results of RFLP analysis showed that the seventh linkage group existed in detail. The function of this gene is known as RIP(repeat induced point mutation). After the operation of the seed, the offspring of the plant has a different sensitivity test, a temperature sensitivity test, and a sensitivity test. The DNA of the plant must be extracted from the restriction enzyme. The enzyme must be cut off. After swimming, the enzyme must be removed. The enzyme must be removed from the flap. The enzyme must be removed from the flap. The enzyme must be removed from the flap. The second possibility is to test the possibility of a match.すなわち(1)アカパンカビのflap遗伝子はessentialであるため、この遗伝子に変异を持つ株は回収できない。(2)This gene is RIP resistant, RIP resistant, DNA resistant. The essential gene is produced in cells, and the essential gene is produced in cells. The method of RIP and call is essential to confirm the implementation. DNA structure is related to the restriction enzyme.