パーキン及び関連蛋白質の構造研究

Parkin及相关蛋白的结构研究

• 批准号: 11157209
• 负责人: 田中 信夫
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157209/
• 关键词: パーキン; 病因性蛋白質; 立体構造

本研究では、パーキンをはじめとした病因性蛋白質の構造研究を目指した。1)パーキンは結晶化の試料を得るために大量発現について検討した。本蛋白質は大腸菌により発現させるとInclusion Bodyを形成し、可溶画分に得ることができないことが他明らかとなった。このためInclusion Bodyより界面活性剤などを用いて目的蛋白質を可溶化することを検討し、年度内に可溶化した試料を調整する予定である。2)病気との関連でβ-アミロイドのβ鎖の形成に対する種々の金属イオンの影響をしらべるためチオフラビンというβ構造に特異的に結合する蛍光色素を用いて調べた。この結果、いづれの金属イオンの添加によってもβ構造への転移が押さえられることが分かった。特に、Znなどの添加ではこの傾向が強く現れる。3)白血病に関連したヘリカーゼの発現と結晶化 白血病においてDNAと結合し巻き戻す役割を担うヘリカーゼの構造研究のため、大腸菌およびバキュロウイルスを用いて発現系を構築した。その結果、両システムにおいて蛋白質を単離できることがわかった。現在のところ、大腸菌の1リットルの培養から2mgの酵素が精製できることがわかった。現在、さらに多くの酵素を得るため精製の改良を検討している。

This study aims to study the structure of pathogenic proteins. 1) Crystallization of the sample was achieved in large quantities. This protein is produced in E. coli and forms an Inclusion Body. Soluble fractions are produced in E. coli. The Inclusion of the target protein in the sample is determined by the solubility of the sample. 2)The relationship between the disease and the formation of β-lock is related to the influence of metal on the formation of β-structure. As a result, the addition of metal to the structure of the beta structure is a matter of time. Special, Zn, Zn, 3)Leukemia is related to the development and crystallization of DNA. The result is that the protein content is higher than that of the protein content. Now, the culture of E. coli is 2mg, and the enzyme is refined. Now, we have a lot of enzymes to refine and improve.

项目成果

H. Hamada et al.: "Medium temperature, 310K, provides single crystal of orotate phosphoribosyltransferase from thermus thermophilus"Acta Crystallogrphica. D55. 345-346 (1999)

H. Hamada 等人：“中温，310K，提供了来自嗜热栖热菌的乳清酸磷酸核糖基转移酶的单晶”Acta Crystallogrphica。

S. Akanuma: "Further improvement of the thermal stability of a partially Stabilized B subtilis 3-isopropylmalate dehydrogenase variant by random and site-directed mutagenesis"Eur. J. Biochem.. 260. 499-504 (1999)

S. Akanuma：“通过随机和定点诱变进一步提高部分稳定的枯草芽孢杆菌 3-异丙基苹果酸脱氢酶变体的热稳定性”Eur。