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リピド中間体生合成の制御による糖鎖リモデリング

通过控制脂质中间体生物合成进行聚糖重塑

基本信息

批准号：
11159213
负责人：
西川義尚
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス乳癌由来FM3A細胞から[2-^3H]マンノースを用いたトリチウム自殺法による選択的濃縮を経て分離した温度感受性変異株G258は、糖蛋白のアスパラギン結合型糖鎖の前駆体であるリピド中間体生合成過程に温度感受性変異があり、低温では正常にGlc_3Man_9GlcNAc_2-P-P-Do1まで生合成できるが、高温ではMan_3GlcNAc_2-P-P-Do1付近で生合成を停止する。我々は現在、このG258変異株のリピド中間体生合成変異(マンノース転移酵素IV活性の変異?)を相補するヒト遺伝子のクローニングを試みている。今年度はその変異を相補する活性を持つヒトMegaYACクローン923F5を同定した。この923F5に含まれるヒトDNA断片は13番染色体に由来し、サイズは1.06Mbである。現在、923F5のコスミドライブラリーを作成し、そのコンティグマップを作成している。我々は、また、リピド中間体生合成過程において、G258変異株の変異部位に近いマンノース転移酵素Iおよびマンノース転移酵素IIIに関し、その酵母遺伝子(ALG1およびALG2)の推定アミノ酸配列をもとに、それと相同なヒト遺伝子の分離を試みている。今年度はALG1相同ヒトcDNAの分離と翻訳領域の全塩基配列を決定し、Hmat-1遺伝子と命名した。これはリピド中問体生合成に直接働くマンノース転移酵素(9種類)の遺伝子としては、高等動物で始めてのクローニング例である。更に、現在、そのゲノム構造および発現調節機構の解析、アンチセンスRNAよるHmat-1遺伝子の発現阻害研究を行っている。一方、ALG2相同ヒトcDNAの翻訳領域の全塩基配列についても決定の目途がたった。以上の研究により、我々はリピド中間体生合成段階での糖鎖リモデリング、及び、ヒト糖蛋白糖鎖不全症(CDGS)の遺伝子診断のためのプローブを手に入れることに成功した。

G258 is a temperature-sensitive variant of a glycoprotein derived from FM3A cells. It is a temperature-sensitive variant of a glycoprotein derived from FM3A cells. It is a temperature-sensitive variant of a glycoprotein derived from FM3A cells. It is a temperature-sensitive variant of a glycoprotein derived from FM3A cells. The synthesis of Man_3GlcNAc_2-P-P-D_2O_1 was stopped at high temperature. I now have the G258 variant, and I have the G258 variant. The first step is to improve the quality of the products. This year, the activity of MegaYAC 923F5 is constant. 923F5 contains DNA fragments of 13 chromosomes. Now, 923F5 is ready to go. In this paper, we try to isolate the putative acid sequences of yeast genes (ALG1 and ALG2) in different parts of G258 variant strains. This year, the ALG-1 cDNA was isolated and the sequence of the cDNA was determined. The Hmat-1 cDNA was named. In this case, the enzyme is directly transferred from the enzyme to the higher animal. In addition, the present study on the mechanism of gene expression regulation and gene expression inhibition of Hmat-1 gene was carried out. A side, ALG2 identical cDNA of the inverted domain of the whole base alignment, determination of the purpose of the target The above studies have been successful in the diagnosis of CDGS, including the synthesis of intermediate glycoproteins, and in the diagnosis of CDGS.