発生:分化におけるアスパラギン結合型糖鎖の制御機構とその意義

研究进展：天冬酰胺连接糖链分化的控制机制及其意义

• 批准号: 07770101
• 负责人: 井原 義人
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770101/
• 关键词: N-グリカン; N-アセチルグルコサミン転移酵素V; 遺伝子発現; 糖鎖

N-アセチルグルコサミン転移酵素V(GnT-V)はN-グリカンの分枝構造の決定に関与する糖鎖生合成酵素であり、本酵素により合成されるb1-6分枝構造は癌細胞の転移性の獲得などに伴うその構造の増加などの点から注目されている。平成7年度はGnT-V遺伝子の発現制御機構を明らかにするためヒトGnT-Vの遺伝子構造の解析および遺伝子発現プロモーターの検索を行った。われわれが得たヒトGnT-VcDNAをプローブとして、ヒト末梢血ゲノムDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、12個のクローンを分離した。解析の結果、ヒトGnT-Vのタンパク翻訳領域はexon2からexon17の16個のエクソンより成り、2番染色体に約150kbpにわたって存在することが明らかとなった。GnT-Vのタンパク翻訳開始点を決定するため、各種の癌細胞株(神経芽細胞腫のGOTO細胞、大腸癌のCoIo201細胞、胆管癌のHuccT1細胞)のmRNAを鋳型として5′-RACEを行った。解析の結果、GnT-V遺伝子が5′-非翻訳領域のalternative splicingにより細胞特異的な多重プロモーターにより制御されている可能性が示唆された。さらに、HuccT1細胞から得られた結果より、exonlの上流およびintronlがGnT-V遺伝子のプロモーターとして機能している可能性を見い出した。今後、GnT-Vの遺伝子転写制御部位の検索、解析をさらに進めることにより癌細胞の転移性獲得などの悪性化にともなう発現メカニズムの解明を行い、N-グリカン枝分かれ糖鎖構造の癌性変化における生理的意義を明らかにしていく予定である。

N-linked ribozyme V(GnT-V) is related to the determination of the branching structure of N-linked ribozyme, and the synthesis of this enzyme is related to the acquisition of the branching structure of cancer cells. In 2007, the GnT-V gene development control mechanism was established to analyze the GnT-V gene structure and to implement the GnT-V gene development control mechanism. The GnT-V cDNA sequence was isolated from the 12 cDNA sequences. The analysis results show that the GnT-V chromosome has 16 chromosomes in exon2 and exon17, and 2 chromosomes have about 150kbp. GnT-V gene transcription initiation point was determined. mRNA transcription of GnT-V gene was determined in various cancer cell lines (GTO cells in neuroblastoma, CoIo201 cells in colorectal cancer, and HuccT1 cells in cholangiocarcinoma). The results of the analysis, GnT-V genes and alternative splicing of 5′-non-inverted domains indicate the possibility of cell-specific multi-domain control. HuccT1 cells were found to be highly functional in GnT-V cells. In the future, the detection and analysis of GnT-V gene expression control sites will be further developed, and the physiological significance of N-linked gene branching will be clarified.

项目成果

Yoshimura,M.: "Suppression of lung metastasis of B16 mouse melanoma by N-acetylglucosaminyltransferase III gene transfection" Proc.Natl.Acad.Sci.,USA. 92. 8754-8758 (1995)

Yoshimura,M.：“通过 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 III 基因转染抑制 B16 小鼠黑色素瘤的肺转移”Proc.Natl.Acad.Sci.，美国。

Ihara,Y.: "Effects of dibutyryl cAMP and bromodeoxyuridine on expression of N-acetylglucosaminyltransferase III and V in GOTO neuroblastoma cells." Glycoconjugate J.12. 784-794 (1995)

Ihara,Y.：“二丁酰 cAMP 和溴脱氧尿苷对 GOTO 神经母细胞瘤细胞中 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 III 和 V 表达的影响。”

Saito,H.: "Organization of the human N-acetylglucosaminyltransferase V gene." Eur.J.Biochem.233. 18-26 (1995)

Saito,H.：“人类 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 V 基因的组织。”

Miyoshi,E.: "Transforming growth factor β up-regulates expression of the N-acetylglucosaminyltransferase V gene in mouse melanoma cells" J.Biol.Chem.270. 6216-6220 (1995)

Miyoshi, E.：“转化生长因子 β 上调小鼠黑色素瘤细胞中 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 V 基因的表达”J.Biol.Chem.270 (1995)。

Miyoshi,E.: "Gene expression of N-acetylglucosaminyl-transferases III and V:A possible implication for liver regeneration." Hepatology. 22. 1847-1855 (1995)

Miyoshi,E.：“N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 III 和 V 的基因表达：对肝脏再生的可能影响。”