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ヘムオキシゲナーゼ1欠損症の発見:その病態の生化学的,分子生物学的解析

血红素加氧酶 1 缺陷的发现：其病理学的生化和分子生物学分析

基本信息

批准号：
11877128
负责人：
小泉晶一
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1)ヘムオキシゲナーゼ1(HO-1)に対する単クローン抗体を用いた生検肝組織の免疫組織染色で患児肝にはHO-1が染色されなかった.2)患児末梢血細胞およびLCL細胞株を用いてウエスタンブロッティング法を実施したところ,HO-2蛋白は対照と同等に発現がみられたが,HO-1蛋白はヘミンなどのストレス刺激後でも全く発現がみられなかった.以上より本例のHO-1欠損症の診断が確定した.3)HO-1mRNAはRT-PCR法により,その発現が確認された.4)患児および両親のHO-1遺伝子解析から,母親ではエクソン2の欠損,父親ではエクソン3に2塩基欠損があることがわかり,患児はその複合ヘテロ接合体であることが知れた.さらに母親アリルにはAlu-Alu関連遺伝子再構成に基づく,エクソン2を含む大きな染色体遺伝子の部分欠損が証明された.5)正常HO-1遺伝子を含むレトロウイルスベクターの作成し,患児細胞株LCLへ遺伝子導入したところ,HO-1蛋白発現と機能の部分的正常化がみられた.ただしこのHO-1発現は恒常的で,生理的にみられるようなストレス誘導性発現ではなかった.6)患児の2度の腎バイオプシー標本と剖検材料の免疫学的検討から,HO-1欠損症では腎尿細管に対するストレス障害が著明であることが知れた.各種腎疾患においても腎尿細管障害が著明であった.7)正常ヒト末梢血単核細胞をフローサイトメトリーで,単球,リンパ球に画分した.細胞刺激後,HO-1mRNA発現をRT-PCRで,HO-1蛋白発現をフローサイトメトリー法でみると,単球画分でHO-1発現が強く,リンパ球では逆に弱く,細胞系特異的なHO-1発現調節機構の存在が示唆された.

1) Immunohistochemical staining of human liver tissue was used to detect the antibody. 1) the immune tissue of the liver was stained with the immune tissue of the liver. 2) the peripheral blood cells were stained with HO-1 and the cell lines of LCL cells were detected by immunoassay, while those of HO-2 protein were detected by immunoassay. After stimulation of HO-1 protein, we found that there was no significant difference between the two groups. In the above example, the HO-1 deficiency syndrome was confirmed. 3) the HO-1mRNA RT-PCR method confirmed the diagnosis. 4) the mother had the HO-1 syndrome, the mother had the disease, the parent had the disease, the parent had the gene 3, and the parent had the gene. The Alu-Alu genes of the mother and mother were reorganized into genes, and the genes of the chromosomes were not found in the normal HO-1 cells. 5) the genes of the normal LCL cells were cloned into the cells of the infected cells, and the HO-1 protein was partially normalized. The symptoms of heme oxygenation (Ho-1) are constant, and the physiology is abnormal. 6) the symptoms of 2 degrees of illness, the signs of autopsy, the immunology of the materials, the symptoms of HO-1, the urine tube, the urine tube, the urine, the urine, the For all kinds of diseases and diseases, urine tube damage is clearly indicated. 7) normal peripheral blood nuclear cell count, blood cell count, and so on. After cell stimulation, HO-1mRNA showed RT-PCR, HO-1 protein showed that HO-1 was strong, HO-1 was weak, and cell line specific HO-1 was found to be sensitive.