α(1→3)Galノックアウトマウスを用いた異種移植拒絶反応機序の解析

α(1→3)Gal敲除小鼠异种移植排斥机制分析

• 批准号: 11877199
• 负责人: 富永 隆治
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877199/
• 关键词: ドナー特異的免疫寛容; キメリズム; cyclophosphamide; Busulfan; α-Gal; B細胞; Cyclophosphamide(CP); 移植後冠動脈病変; 頚部異所性心移植; 薬剤誘導性特異的免疫寛容; 永久的キメラ状態

我々はこれまでcyclophosphamideを用いたキメリズムに基づく免疫寛容の誘導系について1985年より実験を行い、50報以上の報告を行ってきた。マウスにおいて、MHC一致、マイナー抗原不一致の組み合わせにおいて、ドナー脾細胞1x108投与後cyclophosphamide200mg/kg投与するという簡単なプロトコールにて、永久的なキメリズムと皮膚移植片の永久生着が認められる。また、cyclophosphamide200mg/kg投与に加え、Busulfan25mg/kg投与後、ドナー骨髄細胞1x108個投与することにより、MHC不一致の組み合わせにおいても永久的なキメリズムと皮膚移植片のキメリズムが得られ、ドナー特異的免疫寛容が誘導できることを報告した。(J.Immunol.1999)。このプロトコールを用い、異種移植における免疫寛容を誘導する目的で実験を行い、プロトコールの改良を行っている。抗α-Gal抗体はヒトブタ間での異種移植における超急性拒絶反応を引き起こす原因となる抗体として知られているが、この抗体を産生するB細胞における免疫寛容の誘導を目的としてα-Galノックアウトマウスを用いた実験を行っている。MHC不一致の組み合わせにおいて、α-GalK.O.マウスにWTマウスの脾細胞を投与すると抗α-Gal抗体の上昇を認め、心移植片は超急性拒絶反応により拒絶されるが、脾細胞を投与後にcyclophosphamide200mg/kg投与することにより抗α-Gal抗体は消失し、B細胞における免疫寛容が誘導された。更に心移植片における超急性拒絶反応は認めなかった。今後更に実験を行い、B細胞での免疫寛容の誘導におけるメカニズムを解析していく。また、ドナーをF344ラット、レシピエントをB10マウスを用い、異種移植の実験を行っている。day-2にドナー脾細胞1x108投与、cyclophosphamide200mg/kg及びBusulfan30mg/kgをday0に投与し、day1にドナー骨髄細胞1x108個投与することによりマイクロキメリズム及び皮膚移植片の生着延長を認めている。今後更に皮膚移植片の永久生着ができるプロトコールを開発していく。

I 々 は こ れ ま で cyclophosphamide を with い た キ メ リ ズ ム に base づ く induced immune understanding let の is に つ い て in 1985 よ り be 験 を line い, more than 50 quote の report を っ て き た. マ ウ ス に お い て, agreement of MHC, マ イ ナ ー antigen not consistent の group み わ せ に お い て, ド ナ ー spleen cells cyclophosphamide200mg/kg after 1 x108 cast and cast with す る と い う Jane 単 な プ ロ ト コ ー ル に て and permanent な キ メ リ ズ ム と skin grafts の permanent with が recognize め ら れ る. ま た, cast and に え, Busulfan25mg cyclophosphamide200mg/kg/kg, after he and ド ナ ー 1 x108 a cast with bone marrow cells す る こ と に よ り, MHC inconsistencies の group み わ せ に お い て も permanent な キ メ リ ズ ム と skin grafts の キ メ リ ズ ム が must ら れ, ド ナ <s:1> specific immune tolerance が induces で る る とを とを reports of <s:1> た. (J. Imunol.1999) こ の プ ロ ト コ ー ル を い, xenotransplantation に お け る immune understanding let を induced す で る purpose be 験 を い, プ ロ ト コ ー ル の improved line を っ て い る. Resistance to alpha Gal antibody は ヒ ト ブ タ between で の xenotransplantation に お け る super acute refused to reverse 応 を lead き up こ す reason と な る antibody と し て know ら れ て い る が, こ antibodies の を す る B cells に お け る immune induced を purpose understanding let の と し て alpha Gal ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を with い た be 験 を line っ て い る. MHC not consistent の group み わ せ に お い て, alpha GalK. O. マ ウ ス に WT マ ウ ス の cast with spleen cells を す る と alpha Gal resistance rising antibody の を confess め, heart stents は super acute refused to reverse 応 に よ り refused さ れ る が を cast, spleen cells and after に cyclophosphamide200mg/kg cast with す る こ と Youdaoplaceholder0 <s:1> anti-α -Gal antibody によ disappearance における b-cell における immune tolerance が induction された. More に heart transplant film における hyperacute rejection of anti応 recognition めな った った. In the future, more に experiments will be conducted on を, B-cell で, <s:1> immune tolerance <e:1> induction, におけるメカニズムを analysis, く, て, く, く. ま た, ド ナ ー を F344 ラ ッ ト, レ シ ピ エ ン ト を B10 マ ウ ス を い, xenotransplantation の be 験 を line っ て い る. Day - 2 に ド ナ ー 1 x108 cast with spleen cells, cyclophosphamide200mg/kg and び Busulfan30mg/kg を day0 に cast and し day1 に ド ナ ー 1 x108 a cast with bone marrow cells す る こ と に よ り マ イ ク ロ キ メ リ ズ ム and び skin grafts with extended を の Recognize めて めて る. In the future, there will be more に skin grafts <e:1> that will permanently bear がで るプロトコ るプロトコ るプロトコ を を を and develop く て く く.

项目成果

Yoshikawa,M.: "200mg/kg cyclophosphamide lacks ability to induce pluripotent stem cell engraftment in mice"Transplant.Proc.. 31(5). 1939 (1998)

Yoshikawa,M.：“200mg/kg 环磷酰胺缺乏诱导小鼠多能干细胞植入的能力”Transplant.Proc.. 31(5)。

Yoshikawa M,Tomita Y, et al: "Inability of cyclophosphamide-induced tolerance to permit engraftment of pluripotent stem cell contained in moderate number of syngeneic bone marrow cells."Immunobiology. 201. 552-567 (2000)

Yoshikawa M、Tomita Y 等人：“环磷酰胺诱导的耐受性无法使中等数量的同基因骨髓细胞中包含的多能干细胞植入。”免疫生物学。

Yoshikawa,M.: "Lack of pluripotent stem cell engraftment in cyclophosphamide-induced tolerance"Transplant.Proc.. 31. 898-899 (1999)

Yoshikawa,M.：“环磷酰胺诱导的耐受性中缺乏多能干细胞植入”Transplant.Proc.. 31. 898-899 (1999)

Yoshikawa,M: "Inability of cyclophosphamide to permit pluripotent stem cell engraftment in cyclophosphamide-induced tolerance"Immunobiology. in press.

Yoshikawa，M：“在环磷酰胺诱导的耐受性中，环磷酰胺无法允许多能干细胞植入”免疫生物学。

Tomita Y et..al: "Induction of mixed chimerism and permanent skin graft tolerance by addilional myelosuppressive treatments across fully H-2 mismatched barriers in mice primed with allogeneic spleen cells followed by cyclophosphamide."J.Immunol. 165. 34-4

Tomita Y 等人：“在用同种异体脾细胞和环磷酰胺进行免疫的小鼠中，通过额外的骨髓抑制治疗跨越完全 H-2 不匹配的屏障，诱导混合嵌合和永久皮肤移植耐受。”J.Immunol。