婦人科腫瘍に対する電気穿孔法を用いた遺伝子治療のための基礎研究

妇科肿瘤电穿孔基因治疗基础研究

• 批准号: 11877282
• 负责人: 藤井 信吾
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877282/
• 关键词: 子宮平滑筋肉腫; 悪性腫瘍; カルポニンh1遺伝子; in vivo電気穿孔法; 遺伝子治療; 腫瘍抑制遺伝子; p53; 抗癌剤; ブレオマイシン; 低電圧パルス

昨年はヌードマウスに移植した子宮平滑筋肉腫に電気穿孔法によりブレオマイシンを導入することによって、肉腫を顕著に縮小することができたことを報告したが、本年度は、子宮平滑筋肉腫において、個体レベルで悪性組織に腫瘍抑制的に働く遺伝子を導入することによって、治療困難な子宮平滑筋肉腫の治療を行うための基礎的研究を行った。腫瘍抑制遺伝子導入は、子宮平滑筋肉腫にブレオマイシンを導入した実験結果に基づいた条件で行った。子宮平滑筋肉腫細胞株SK-LMS-1細胞をヌードマウスに移植後、直径10mmの腫瘤が出来た段階で、カルポニンh1 cDNAをNeo耐性遺伝子及びCMVのpromoterを有するvector(pCMV-NEO-BAM3)に組み込んだ遺伝子を、電圧100V、電流50mA、一秒間に8サイクルで低電圧電気穿孔法により導入し、腫瘤の大きさを測定するとともに病理学的な観察をおこない、腫瘍性格が消失するか否かを検討した。その結果、7例中4例において、ヌードマウスに移植した子宮平滑筋肉腫の腫瘤の増大が抑制された。現在、遺伝子導入された組織においてカルポニンh1の発現と他の細胞骨格蛋白質の発現への影響の有無、細胞周期調節因子の発現への影響の有無、さらにタンパク質を抽出してウエスタンブロット法にて蛋白質の発現を比較し、抗カルポニンh1モノクローナル抗体で蛍光免疫染色にて、発現の局在を確認している。このように矩形波を用いたin vivo低電圧電気穿孔法により、ブレオマイシンのみならず腫瘍抑制遺伝子であるカルポニンh1を導入することによってヌードマウスに移植した子宮平滑筋肉腫を顕著に縮小することができたことより、低電圧電気穿孔法で抗癌剤や腫瘍抑制遺伝子を用いて子宮平滑筋肉腫の治療の可能性が示唆され、今後臨床応用の道が開かれるものと思われる。

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项目成果

Koyama,T.et al.: "MR imaging of endometrial stromal sarcoma : correlation with pathologic findings"American Journal of Roentogenology. 173. 767-772 (1999)

Koyama,T.等人：“子宫内膜间质肉瘤的磁共振成像：与病理结果的相关性”美国放射学杂志。

Lu,X, et al.: "Loss of heterozygosity among tumor suppressor genes in invasive and in situ carcinoma of the uterine cervix"International Journal of Gynecologic Cancer. 10. 451-458 (2000)

Lu,X, et al.：“子宫颈浸润性和原位癌中肿瘤抑制基因杂合性的丧失”国际妇科癌症杂志。

Zhai,YL.et al.: "Expression of cyclins and cyclin dependent kinases in smooth muscle tumors of the uterus"International Journal of Cancer. 84. 244-250 (1999)

Zhai，YL.等人：“子宫平滑肌肿瘤中细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的表达”国际癌症杂志。

Horiuchi,A., et al.: "HCG promotes proliferation of uterine leiomyomal cells more strongly than that of myometrial smooth muscle cells in vitro"Molecular Human Reproduction. 6. 523-528 (2000)

Horiuchi,A. 等人：“在体外，HCG 比子宫肌层平滑肌细胞更能促进子宫平滑肌细胞的增殖”《分子人类生殖》。

Itoh,K., et al.: "A comparative analysis of cross-sectional imaging techniques in minimal deviation adenocarcinoma of the uterine cervix"British Journal of Obstetrics and Gynecology. 107. 1158-1163 (2000)

Itoh,K. 等人：“宫颈微小偏差腺癌横断面成像技术的比较分析”英国妇产科杂志。