マウスを用いた新規視物質遺伝子の導入による色覚高次化機構の解明

阐明通过将新型视觉材料基因引入小鼠增强色觉的机制

• 批准号: 11878160
• 负责人: 河村 正二
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11878160/
• 关键词: ゼブラフィッシュ; 視物質; オプシン; 色覚; GFP; 発現制御; プロモーター; 遺伝子導入

マウスは2種類の錐体視物質を同一の錐体細胞で発現していることが明らかとなり、新規視物質遺伝子の導入による色覚高次化機構の解明には適さないことが明らかになった。そこで対象をゼブラフィッシュのみに絞ることとした。ゼブラフィッシュの桿体視物質遺伝子についてgreen fluorescent protein(GFP)レポーター遺伝子を用いてプロモーター解析をおこなった。桿体視物質遺伝子については隣接上流DNA領域4.2、2.5、1kbを用いてGFP発現誘導能を調べた。各発現コンストラクトをゼブラフィッシュの受精卵にマイクロインジェクションし、それぞれ50%以上の個体で網膜にGFPの発現を確認した。さらに10-30%の個体では脳、おそらく松果体にGFP発現を観察した。4.2kbの上流域コンストラクトを導入した個体約100匹のうち1匹は次世代に発現コンストラクトを伝達した。このことはF1でのゲノムDNAに対するPCR及びサザンハイブリダイゼーションにより実証した。その個体をfounderとしてF1及びF2を飼育し、GFPの発現が眼球特異的であることをウェスタンブロッティング及びGFP発光観察により確認し、さらに網膜の桿体視細胞特異的であることをGFP発光観察により立証した。さらにGFP発現誘導開始時期は桿体視物質遺伝子発現と同じ受精後48時間であり、開始場所は網膜腹側の同一箇所であることも確認した。これらから桿体視物質遺伝子のプロモーター領域が遺伝子上流4.2kb内にあることが明らかとなった。インジェクションをおこなった個体にみられた松果体での発現誘導はトランスジェニックラインでは観察されなかった。

The two types of pyramidal visual substance are found in the same pyramidal cell, and the new pyramidal visual substance is introduced into the pyramidal cell. The first time I saw him, I saw him. Green fluorescent protein(GFP) is used for the analysis of fluorescent protein. The gene expression of GFP was modulated by DNA fragments of 4.2, 2.5, and 1kb in adjacent upstream DNA regions. The presence of GFP in the retina was confirmed in more than 50% of the fertilized eggs detected. Today 10-30% of individuals are observed in the pineal gland. 4.2 kb of upper watershed population was introduced, and about 100 individuals were found in the next generation This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with a woman. The development of GFP in the retina was confirmed by the observation of GFP in the F1 and F2 cells. GFP induction begins at the same time as somatic substance initiation at 48 hours after fertilization. A 4.2 kb domain of the rod optic gene is available. The development of pineal gland in the individual is induced by the development of pineal gland.

项目成果

河村正二: "新世界サルRed-Green視物質遺伝子と色覚の進化"霊長類研究. 16. 111-124 (2000)

Shoji Kawamura：“新世界猴红绿色视觉物质基因和色觉的进化”灵长类动物研究。 16. 111-124 (2000)。