Subunit interaction of Sodium Pump

钠泵的亚基相互作用

基本信息

  • 批准号:
    11680620
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.79万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Based on the kinetic investigation of the formation and decay of phosphoenzyme intermediate Na/K-ATPase labeled with several fluorescent probes, we have found that both BIPM and RH-421 probes changes their fluorescence intensity depending on the accumulating intermediates. The data suggest that each probe can sense not the formation of phosphoenzyme itself but the binding state of sodium or potassiumions. Fluorescence changes of each probe did not reflect precisely the same molecular events.The amount of ATP (or phosphate) bound to the enzyme during ATP hydrolysis has been measured. Furthermore, we have compared the amount of occluded Rb in the presence of various combination of ligands. Na/K-ATPase has been shown to bind 1 and 0.5 mol 32P/mol a-subunit in the presence [a-32P]ATP and [g-32P]ATP, respectively, accompanied by a maximum accumulation of 0.5 mol of phosphoenzyme. The enzyme occluded a maximum of 2 mol of Rb/mol of a-subunit. The addition of Na, Mg and ATP induced 1 mol 86Rb/ mol a-subunit with no detectable phosphoenzyme. 0.5 mol of ATP can still bind to Rb occluded enzyme. Electron microscopy of rotary shadowed solubilized Na/K-ATPases and an antibody-Na/K-ATPase complex indicated the presence of tetraprotomeric structures (ab) 4. These data suggest that Na/K- dependent ATP hydrolysis occur via the sequential appearance of (NaE1 P : EATP) 2, (E2P : EATP) 2 and (KE2 : EATP) 2, each of which has been previously referred to as NaE1P, E2P and KE2 in Post-Albers mechanism. We propose a tetramer mechanism for ATP hydrolysis in Na/K-ATPase.
通过对几种荧光探针标记的磷酸酶中间体Na/K-ATP酶的形成和衰减的动力学研究,发现BIPM和RH-421探针的荧光强度随中间体的积累而变化。这些数据表明,每个探针可以感知的不是磷酸酶本身的形成,但钠或钾离子的结合状态。每个探针的荧光变化并不能精确地反映相同的分子事件。在ATP水解过程中结合到酶上的ATP(或磷酸盐)的量被测量。此外,我们还比较了在各种配体组合存在下的封闭Rb的量。Na/K-ATP酶在[a-32 P]ATP和[g-32 P]ATP存在下分别与1和0.5 mol 32 P/mol α-亚基结合,并伴随最大0.5 mol磷酸酶积累。该酶封闭的最大值为2摩尔Rb/摩尔的α-亚基。Na、Mg和ATP的加入诱导了1 mol 86 Rb/ mol α-亚基,但没有检测到磷酸酶。0.5 10 mol ATP仍能与Rb封闭的酶结合。旋转阴影溶解Na/K-ATP酶和抗体-Na/K-ATP酶复合物的电子显微镜检查表明存在四元体结构(ab)4。这些数据表明,Na/K依赖性ATP水解通过(NaE 1 P:EATP)2、(E2 P:EATP)2和(KE 2:EATP)2的顺序出现而发生,其中的每一个先前在Post-Albers机制中被称为NaE 1 P、E2 P和KE 2。我们提出了Na/K-ATP酶中ATP水解的四聚体机制。

项目成果

期刊论文数量(8)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
K.Taniguchi et al.: New Aspects of Na/K-ATPase : Acid Labile ATP and/or ADP/Pi Binding to the Tetraprotomer, (αβ)_4 in Na/K-ATPase and Related ATPases (Elsevier). 15-18 (2000)
K. Taniguchi 等人:Na/K-ATP 酶的新方面:酸不稳定 ATP 和/或 ADP/Pi 与 Na/K-ATP 酶和相关 ATP 酶中的四原体 (αβ)_4 结合 (Elsevier) (Elsevier)。 (2000)
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
T.Yokoyama et al.: "Acid Labile ATP and/or ADP/Pi Binding to the Tetraprotomeric Form of Na/K-ATPase Accompanying Catalytic Phosphorylation-Dephosphorylation Cycle"Journal of Biological Chemistry. 274. 31792-31796 (1999)
T.Yokoyama等人:“酸不稳定ATP和/或ADP/Pi结合到Na/K-ATP酶的四原体形式,伴随催化磷酸化-去磷酸化循环”生物化学杂志。
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
谷口和弥: "Naポンプのリン酸化・脱リン酸化反応中間体に化学量論的に結合するATPとADP/Piの発見と(αβ)4量体によるエネルギー共役仮説"日本薬理学雑誌. 114. 179-184 (1999)
Kazuya Taniguchi:“通过 (αβ) 四聚体发现 ATP 和 ADP/Pi 以化学计量方式与 Na 泵的磷酸化/去磷酸化中间体结合以及能量耦合假说”,《日本药理学杂志》114。179-184 (1999)。
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    0
  • 作者:
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M.Kanagawa: "Direct Evidence for in vitro Reversible Tyrosine Phosphorylation of the N-teminal Domain of the H/K-ATPase α-subunit in Mammalian Stomach Cells"Journal of Biochemistry. 126. 266-270 (1999)
M. Kanakawa:“哺乳动物胃细胞中 H/K-ATPase α 亚基 N 末端结构域的体外可逆酪氨酸磷酸化的直接证据”生物化学杂志 126. 266-270 (1999)。
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M.Kanagawa: "Direct Evidence for in Vitro Reversible Tyrosine Phosphorylation of the N-terminal Domain of the H/K-ATPase α-subunit in Mammalian Stomach Cells"Journal of Biochemistry. 126. 266-270 (1999)
M. Kanakawa:“哺乳动物胃细胞中 H/K-ATPase α 亚基 N 末端结构域的体外可逆酪氨酸磷酸化的直接证据”《生物化学杂志》126. 266-270 (1999)。
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