ペプチドチップを用いた生体分子-ペプチド相互作用のコンビナトリアル的解析法の開発

使用肽芯片开发生物分子-肽相互作用的组合分析方法

基本信息

批准号：
00J00714
负责人：
上山博幸
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J00714/
关键词：
インターカレータ蛍光 DNA マイクロアレイ

项目摘要

人間の遺伝子の全容が明らかとなり、2003年のうちに全ゲノム配列が決定される見通しである。しかしながら、ゲノムの配列決定は、あくまでもヒトゲノムの全塩基配列を決定しただけにすぎず、それだけではあまり意味をもたない。重要なのは、そのゲノム情報から遺伝子の一塩基多型(SNPs)や遺伝子の発現、機能や構造解析を行うポストゲノムの研究である。この蓄積された莫大な量のゲノムを解析するには、解析装置のハイスループット化が必要である。現在、多くの遺伝子を迅速かつ簡便に解析するシステムとしてDNAマイクロアレイ(DNAチップ)が開発されている。しかしながら、従来の手法には多くの課題や問題点が指摘されている。これらの問題点を解決する手法として、ターゲットDNAのハイブリダイゼーション後に、蛍光色素で染色する手法が考えられる。ここで要求されるのは、二本鎖DNA特異的検出試薬である。今回新たに設計・合成した二本鎖DNA検出試薬は、二本鎖DNAに結合するとその特異的な結合によって消光されていた蛍光が大きく増大するが、一本鎖DNAに結合しても蛍光増大が起こらないため、二本鎖DNAのみを検出することが可能である。実際に溶液中で、この新規二本鎖DNA検出試薬を用いて、二本鎖DNAのみを蛍光検出することにも成功した。さらに、DNAマイクロアレイの系にもこの二本鎖DNA検出試薬を適用し、二本鎖DNAのみを高選択的に蛍光検出することができた(この化合物とこの検出システムに関して二つの特許を出願済み)。本手法により、多くのターゲットDNAを迅速かつ簡便に検出する新たな手法を提案することができた。今後は、より実用化のレベルにまで精度を高めることが課題である。

现在，人类基因的全部程度已经清晰，并且整个基因组序列预计将在2003年确定。但是，基因组测序仅仅是对人类基因组的整个碱基序列的确定，并且本身并没有多大意义。重要的是基因组研究，涉及基于基因组信息的单核苷酸多态性（SNP）以及基因表达，功能和结构的分析。为了分析大量累积基因组，需要对分析装置的高通量。当前，DNA微阵列（DNA芯片）正在开发为快速和方便的许多基因的系统。但是，在常规方法中指出了许多问题。解决这些问题的一种方法是在靶DNA杂交后用荧光染料染色。这里需要的是双链DNA特异性检测试剂。新设计和合成的双链DNA检测试剂的荧光显着增加，当双链DNA结合时，其特异性结合已被其特异性结合所淬灭，但是由于即使双链DNA结合在一起，荧光也不会增加，因此只能检测双tranded DNA。实际上，使用这种新型的双链DNA检测试剂，它在溶液中仅在溶液中仅荧光检测中也成功。此外，将此双链DNA检测试剂应用于DNA微阵列系统，仅对双链DNA进行高度选择性的荧光检测（该化合物和该检测系统已提交了两项专利）。已经提出了这种方法来快速，容易检测许多靶DNA。将来面临的挑战是将准确性提高到更实用的水平。