ショウジョウバエを用いたシナプスで機能する情報伝達分子の探索

使用果蝇寻找在突触中起作用的信息传递分子

基本信息

批准号：
00J02663
负责人：
曽根雅紀
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

神経回路の形成過程で重要なシナプス形成およびシナプス可塑性の分子機構を解明するために、本研究においては、シナプスに局在する調節因子、特に情報伝達分子のスクリーニング法を開発する。本研究では、これまでに全く試みられていない独自のアプローチとして、ショウジョウバエの遺伝学を用いたシナプス分子のスクリーニング法を開発する。前年度までに、ショウジョウバエのシナプス間隙に局在する因子であるHIG蛋白質のドメイン解析を行い、HIG蛋白質は、第一補体結合ドメインを欠失するとシナプスに輸送されなくなることを見出した。また、一連のコンストラクトを用いたレスキュ実験の結果から、HIG蛋白質のN末端部分がレスキュー能に必要十分であることを見出した。本年度は、まず、引き続いてHIG蛋白質のドメイン解析を行い、全てのdeletion constructについて、シナプスへの輸送能の有無と、hig変異表現型のレスキュー能の有無を調べた。以上の結果に基づいて、第一補体結合ドメインを欠くHIG蛋白質を用いたエクソントラップベクターを作成し、これを用いた形質転換ショウジョウバエを作成し、さらに遺伝学的方法によってこのベクターのゲノムへの挿入系統を多数作成した。今後は、作成した形質転換ショウジョウバエを用いて、hig変異の行動異常のレスキューを指標にして、シナプス間隙に局在する種々の情報伝達分子をスクリーニングしていく予定である。

为了阐明突触形成和突触可塑性的分子机制，在神经回路的形成过程中很重要，在这项研究中，我们将开发一种针对突触时局部调节剂的筛选方法，尤其是信号传播分子。这项研究开发了一种使用果蝇遗传学筛选突触分子的方法，这是一种完全没有尝试的独特方法。到上一年，进行了果蝇突触裂缝中的HIG蛋白的结构域分析，并发现HIG蛋白不再被转运为突触，因为删除了主要补体结合结构域。此外，从使用一系列构造的救援实验的结果中，发现希格蛋白的N末端部分是必要的，足以挽救能力。今年，我们首先对HIG蛋白进行了域分析，并检查了运输HIG突变表型突触和救援能力的所有缺失构建体。基于上述结果，创建了使用缺乏第一个补体结合结构域的外显子陷阱向量，并创建了使用该载体转化的果蝇，并通过遗传方法创建了该载体的许多插入线中的插入线。将来，我们计划使用我们创建的转化的果蝇来筛选出在突触裂缝中局部的各种信号分子，使用HIG突变中的行为异常的拯救作为指标。