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ヘパリン結合性成長因子ミッドカインの標的組織の同定およびシグナル伝達機構の解明

肝素结合生长因子中期因子靶组织的鉴定及信号转导机制的阐明

基本信息

批准号：
08680761
负责人：
門松健治
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680761/
关键词：
ミッドカインヘパリン成長因子アクチビン形質転換

项目摘要

1.NIH3T3細胞への作用:細胞増殖促進、足場非依存性増殖、ヌードマウスにおける造腫瘍能の3点を満たすことから、MKがMIH3T3細胞を形質転換させる能力を持つことがわかった。但し、これはcDNAを導入した場合におこり、外来性のMK蛋白では誘導されないこと、さらに、cDNA導入に際し、細胞核周辺にMK蛋白の集積がみられることから、NIH3T3細胞の形質転換には細胞に内存性のNKが、分泌型のMKに加えて重要なことが示唆された。また、もう1つの重要な特徴として、形質転換した細胞が基質から自然に遊離する現象がみられた。2.アクチビンとのクロストーク:アフリカツメガエルの初期発生において、アクチビンは中胚葉を誘導し、さらに2次的に神経を誘導する。アフリカツメガエルMKのRNAを初期発生段階のアフリカツメガエルに注入すると、アクチビンによる中胚葉誘導が阻害される。このことはアニマルキャップの伸展の阻害およびRT-PCRによる中胚葉マーカーの発現の抑制の両者で確かめられた。一方、神経誘導では、頭部と体尾部マーカーで大きな違いがあり、前者は誘導され、後者は中胚葉と同様抑制された。MKとアクチビンは直接結合しないことから、各々の細胞内シグナル伝達機構の間でクロストークがあることが示唆された。3.マウス13.5日胚脳神経細胞への応用:ビオチンMKのin situ binding assayにより、マウス13.5日胚の中枢神経を含むいくつかの組織が、MKと結合することが示された。そこで、さらに、13.5日胚脳神経細胞の初代培養を用いて、^<32>Pーリン酸ラベルによって、MKに結合する蛋白を解析した。その結果、400〜700ダルトンを中心にSPS-PAGF上で、幅広くスメアを引くリン酸化された糖蛋白がMKに特異的に結合することが判明した。今年度の成果により、MKの標的細胞として、MIH3T3細胞、アフリカメツガエルの外胚葉、マウス13.5日胚脳神経細胞が明らかになった。今後、MKとアクチビンあるいはTGF-βスーパーファミリーとの相互作用の分子機構解明、細胞内シグナルの動態解析、MKと結合する糖蛋白の解析の3点に力点をおいて、研究を進める。

1. NIH3T3 cell function: cell proliferation promotion, foot-field independent proliferation, cell proliferation However, when cDNA is introduced into NIH 3T3 cells, exogenous MK protein is induced, and when cDNA is introduced into NIH 3T3 cells, accumulation of MK protein around the nucleus is increased. The important characteristics of the cell are: physical and qualitative change, cell separation, and natural dissociation. 2. The early development of the embryo, the induction of the embryo, and the induction of the second nerve. MK RNA is injected into the early stages of development and is inhibited by mesoderm induction. This is the first time that the virus has been detected. One side, nerve induction, head and tail, the former is induced, the latter is inhibited MK is a direct combination of cellular and cellular mechanisms. 3. MK in situ binding assay: MK in situ binding assay, MK in situ binding assay. The analysis of protein binding in primary culture of human embryonic neurons on 13.5 days was carried out<32>. The results showed that 400 ~ 700 cells were isolated from SPS-PAGF, and the protein was isolated from MK. This year's results show that the target cells of MK, MIH3T3 cells, ectodermal leaves, and embryonic neurons of 13.5 days are bright and bright. In the future, the molecular mechanism of TGF-β interaction, the dynamic analysis of intracellular molecules, and the analysis of MK binding glycoproteins will be further studied.