Zur Rolle der Mitochondrien bei der nukleären Reprogrammierung: Charakterisierung und funktionelle Analyse des Mitochondrien-assoziierten Epitopes PG-2

线粒体在核重编程中的作用：线粒体相关表位 PG-2 的表征和功能分析

• 批准号: 5303548
• 负责人: Professor Dr. Christoph Viebahn
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Anatomie und Embryologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Priority Programmes
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5303548?language=en
• 关键词: Zur; Rolle; der; Mitochondrien; bei

Bei der nukleären Reprogrammierung wird durch Einführen eines adulten Zellkernes in eine entkernte Eizelle ein Differenzierungsprogramm reaktiviert, das normalerweise nur während der embryonalen Entwicklung abläuft. Je nach Behandlung der rekonstruierten Eizelle können bestimmte Zelltypen oder ganze Organismen geschaffen werden (Klonieren). Der potentielle Nutzen dieser Technik für den therapeutischen Zell- und Organersatz und für die Grundlagenforschung ist unbestritten, die Erfolgsrate der nukleären Reprogrammierung ist jedoch noch unbefriedigend. Auf der Seite der zugeführten nukleären DNA sind mehrere relevante Eigenschaften untersucht wie z.B. Methylierung, vernetzende Histone, Zellzyklusphase und das Alter des Zellkerns; die aktivierenden, letztendlich entscheidenden Faktoren des Eizellzytoplasmas sind jedoch nur unscharf definiert. Der monoklonale Antikörper PG-2 erkennt beim Kaninchen in primordialen Keimzellen und in frühembryonalen Zellen ein zytoplasmatisches, auf der äußeren Oberfläche der Mitochondrien liegendes Epitop; in frühen Entwicklungsstadien nach Kerntransfer ist das PG-2Antigen jedoch häufig atypisch verteilt, in dem einzelne Blastomeren teilweise oder vollständig negativ sind. Im hier vorgestellten Projekt soll deshalb das PG-2-Epitop durch WesternBlot und anhand von Expressions-cDNA-Banken biochemisch charakterisiert werden. Parallel dazu soll die räumliche Verteilung des PG-2-Antigens im Vergleich mit bekannten zytoplasmatischen Faktoren der frühen Embryonalentwicklung (z.B. Leptin, STAT3) untersucht werden. Außerdem soll der PG-2-Antikörper als Indikator eingesetzt werden, um verschiedene experimentelle Parameter der nukleären Reprogrammierung (z.B. In-vitro-Reifung, Enukleation und Aktivierung der Eizelle) im Tiermodell zu optimieren.

Bei der nukleären Reprogrammierung wird durch Einführen eines adulten Zellkernes in eine entkernte Eizelle ein Differenzierungsprogramm reaktiviert，das normalerweise努尔während der embryonalen Entwicklung abläuft. Je nach Behandlung der reconstruierten Eizelle können bestimmte Zelltypen or der ganze Organismen geschaffen韦尔登（Klonieren）. Der potentielle Nutzen dieser Technik für den therapeutischen策尔- und Organernandfür die Grundlagenforschung is unstritten，die Erfolgsrate der nukleären Reprogrammierung is jedoh nohfriedigend.在核武器DNA的位置上，与z.B.甲基化、修饰组蛋白、Zellzyklusphase和Zellkerns的改变; Eizellzytoplasma的活性、诱导因子尚未确定。单个抗PG-2抗体在原代胚胎和胚胎Zellen中均为阳性，位于线粒体上膜上;在胚胎移植中PG-2抗原的表达为阴性，在胚胎囊胚中为阴性。本研究旨在通过WesternBlot检测PG-2-表位，并结合表达产物-cDNA-Banken的生物化学特征进行韦尔登。平行的方法是通过使用前胚胎发育的酶质体法（z.B.瘦素、STAT 3可抑制韦尔登的表达。PG-2-Antikörper作为一个韦尔登，在核重编程实验参数（z.B.体外再灌注、Enukleation和激活Eizelle）在Tiermodell zu optimieren。