カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIIの神経細胞内局在とシナプス機能の調節

钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的神经元定位和突触功能的调节

• 批准号: 12031218
• 负责人: 山本 秀幸
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12031218/
• 关键词: アストロサイト; インスリン分泌反応; NG108-15細胞; カルモデュリン; カルモデュリンキナーゼII; シナプシンI; MIN6細胞; 燐酸化特異抗体

カルシウム/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMキナーゼII)には4種類のサブユニットの遺伝子が存在する。さらに、それぞれのサブユニットには可変領域のスプライシングの違いにより複数のアイソフォームが存在する。われわれはデルタサブユニットの中のデルタ2アイソフォームが様々な種類の培養細胞において多量に発現していることを見出した。今回、それぞれの培養細胞においてデルタ2の細胞内局在部位を検討した。さらに、インスリン分泌細胞であるMIN6細胞を用いて、デルタ2が神経伝達物質やホルモン分泌に関与する可能性を検討した。1.ラット脳の培養アストロサイトとNG108-15細胞での共焦点レーザー顕微鏡による観察では、デルタ2の局在部位は小胞体とゴルジ体に一致していた。2.MIN6細胞での検討では、1)単離したインスリン分泌顆粒上に、デルタ2とシナプシンIbが局在した。2)デルタ2をMIN6細胞に過剰発現させた後の高濃度グルコースやトルブタマイドの処理により、デルタ2の活性化とインスリン分泌が相関して増強した。3)CaMキナーゼIIはシナプシンIbの566番目と603番目のセリン残基を燐酸化することが知られている。これらの部位が燐酸化されたシナプシンIに対する燐酸化特異抗体を作製した。作製した燐酸化特異抗体を用いて免疫ブロットを行うと、高濃度グルコースやトルブタマイドの処理によりシナプシンIの燐酸化反応が増加した。デルタ2の過剰発現により本反応がさらに増強された。4)点突然変異法により触媒活性のない変異酵素を作製した。作製した変異酵素の過剰発現ではシナプシンIの燐酸化もインスリン分泌反応も増加しないことを確認した。これらの結果は、デルタ2が小胞輸送に伴って分泌顆粒上に移行し、シナプシンIの燐酸化反応を介して、神経伝達物質放出などのシナプス機能やホルモン分泌に関与することを示している。

We need to know that there is a problem with II (CaM communication II). There is a problem in this category. Please tell me that there is a problem in the field, so that there is a problem in the field. In order to improve the quality of the system, we need to improve the quality of the cells in the first place. This time, the cells are in the middle of the disease. The cells are secreted, the cells are MIN6, the cells are secreted, the cells are secreted, and the possibility is expressed. 1. This is the common focus of NG108-15 cell culture. The microcosm is in the same position. The 2.MIN6 cell number is abnormal, 1) the secretion is located on the granule, and the Ib is located in the cell line. 2) after the exposure of MIN6 cells, there is a significant increase in the degree of stress, the degree of stress, the level of stress, the level of activation, the level of secretion, the level of secretion, and the level of activity. 3) CaM, II, Ib, Ib, acid, acid, The site is acidified. I do the acidizing specific antibody. Make a specific antibody against acidizing and use the immune system to immunize the virus, and to increase the concentration of the acid. The current situation is related to the need to strengthen the market. 4) all of a sudden, the activity of the catalyst, the enzyme, the enzyme and the activity of the catalyst. The enzyme filter is used to determine whether the acidified enzyme is responsible for the secretion of the enzyme. The results of the experiment, the results of the results, the results

项目成果

T.Kimura: "Phosphorylation of MARCKS in Alzheimer disease brains"Neuroreport. 11. 869-873 (2000)

T.Kimura：“阿尔茨海默病大脑中 MARCKS 的磷酸化”《神经报告》。

N.Inagaki: "Activation of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II within post-synaptic dendritic spines of cultured hippocampal neurons"J.Biol.Chem.. 275. 27165-27171 (2000)

N.Inagaki：“培养的海马神经元的突触后树突棘内 Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的激活”J.Biol.Chem.. 275. 27165-27171 (2000)

N.Ogata: "Involvement of protein kinase C in superoxide anion-induced activation of nuclear factor-κB in human endothelial cells."Cardiovasc.Res.. 45. 513-521 (2000)

N.Ogata：“蛋白激酶 C 参与超氧阴离子诱导的人内皮细胞核因子-κB 激活。”Cardiovasc.Res.. 45. 513-521 (2000)

Y.Takeuchi: "Increase of brain-derived neurotrophic factor gene expression in NG108-15 cells by the nuclear isoforms of Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase II"J. Neurochem.. 74. 1913-1922 (2000)

Y.Takeuchi：“Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的核亚型增加 NG108-15 细胞中脑源性神经营养因子基因表达”J。

S.Ohmori: "Importance of protein kinase C targeting for the phosphorylation of its substrate, myristoylated alanine-rich C-kinase substrate"J. Biol. Chem.. 275. 26449-26457 (2000)

S.Ohmori：“蛋白激酶 C 靶向其底物（肉豆蔻酰化富含丙氨酸的 C 激酶底物）磷酸化的重要性”J。