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カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIIの神経細胞内局在とシナプス機能の調節

钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 的神经元定位和突触功能的调节

基本信息

批准号：
12031218
负责人：
山本秀幸
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

カルシウム/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼII(CaMキナーゼII)には4種類のサブユニットの遺伝子が存在する。さらに、それぞれのサブユニットには可変領域のスプライシングの違いにより複数のアイソフォームが存在する。われわれはデルタサブユニットの中のデルタ2アイソフォームが様々な種類の培養細胞において多量に発現していることを見出した。今回、それぞれの培養細胞においてデルタ2の細胞内局在部位を検討した。さらに、インスリン分泌細胞であるMIN6細胞を用いて、デルタ2が神経伝達物質やホルモン分泌に関与する可能性を検討した。1.ラット脳の培養アストロサイトとNG108-15細胞での共焦点レーザー顕微鏡による観察では、デルタ2の局在部位は小胞体とゴルジ体に一致していた。2.MIN6細胞での検討では、1)単離したインスリン分泌顆粒上に、デルタ2とシナプシンIbが局在した。2)デルタ2をMIN6細胞に過剰発現させた後の高濃度グルコースやトルブタマイドの処理により、デルタ2の活性化とインスリン分泌が相関して増強した。3)CaMキナーゼIIはシナプシンIbの566番目と603番目のセリン残基を燐酸化することが知られている。これらの部位が燐酸化されたシナプシンIに対する燐酸化特異抗体を作製した。作製した燐酸化特異抗体を用いて免疫ブロットを行うと、高濃度グルコースやトルブタマイドの処理によりシナプシンIの燐酸化反応が増加した。デルタ2の過剰発現により本反応がさらに増強された。4)点突然変異法により触媒活性のない変異酵素を作製した。作製した変異酵素の過剰発現ではシナプシンIの燐酸化もインスリン分泌反応も増加しないことを確認した。これらの結果は、デルタ2が小胞輸送に伴って分泌顆粒上に移行し、シナプシンIの燐酸化反応を介して、神経伝達物質放出などのシナプス機能やホルモン分泌に関与することを示している。

There are four kinds of virus in CaM II, which exist in CaM II. In this case, the number of software solutions available in different fields is not limited to the number of software solutions available in different fields. The number of cells in culture was increased by the number of cells in culture. In this paper, we discuss the intracellular structure of cultured cells. To explore the possibility of using MIN6 cells to secrete substances in the brain. 1. The culture medium of NG108 -15 cells was observed by microscope. 2. MIN6 cells are isolated from secretory granules, 2. 2) The activation and secretion of digoxin 2 were increased after the high concentration of digoxin 2 was detected in MIN6 cells. 3)CaM + II is a protein residue of 566 and 603 amino acids. This site is phosphorylated with phosphorylated antibodies. Phosphorylation of specific antibodies increases in the presence of high concentrations of phosphorylated antibodies. This is the first time I've seen this. 4) The point of sudden change in the method of catalytic activity and enzyme control. The expression of the enzyme is confirmed by the increase in the phosphorylation of the enzyme. The results showed that the phosphorylation of protein I was mediated by cytokinin 2, the secretion of protein I was mediated by cytokinin 2, the secretion of protein I was mediated by cytokinin 2, and the secretion of protein I was mediated by cytokinin 2.