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神経細胞死とカルモデュリン依存性細胞骨格蛋白質燐酸化反応の分子細胞生物学的研究

神经元细胞死亡和钙调蛋白依赖性细胞骨架蛋白磷酸化的分子细胞生物学研究

基本信息

批准号：
06680762
负责人：
山本秀幸
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

平成5年度にPC12細胞を用いて、マウスCaMキナーゼIIアルファーサブユニットを大量に発現する複数の安定なクローン細胞の確立に成功した。得られたクローン細胞を用いて、以下の実験を行なった。1)CaMキナーゼIIアルファーサブユニットに対するcDNAを用いて、ノーザンブロットを施行した。クローン細胞では、CaMキナーゼIIアルファーサブユニットのmRNAの発現が確認された。野生型PC12細胞のCaMキナーゼIIのmRNAは本プローブでは検出されなかった。2)脳のCaMキナーゼIIに対する抗体を用いてイムノブロットを施行した。クローン細胞ではCaMキナーゼIIアルファーサブユニットの発現が確認された。野生型PC12細胞では抗体との反応性が弱く、PC12細胞内に、脳とは異なるアイソザイムの存在が示唆された。3)PCR法によりラットCaMキナーゼIIの4種類のサブユニットのcDNAを得た。野生型PC12細胞ではアルファーサブユニット以外の発現が確認された。4)クローン細胞では微小管付随蛋白質2(MAP2)の燐酸化反応が増強された。本反応は、細胞内カルシウム濃度を増加させる刺激により著しく促進された。5)野生型細胞では細胞内カルシウム濃度を増加させる刺激によりMAP2の燐酸化は著明に減少した。サイクロスポリンを用いた実験から、本脱燐酸化反応にはカルシニューリンが関与することが示唆された。6)細胞をdibutyryl cyclic AMPで処理した場合の神経突起伸展がクローン細胞では著明に抑制された。この抑制は酵素の発現量と相関した。以上の結果より、過剰発現されたCaMキナーゼIIがMAP2の燐酸化を増強させること、及び、神経細胞の形態変化に影響を与えることが明らかとなった。今後、本酵素の細胞死に対する影響を検討する予定である。

In 2005, a large number of stable PC12 cells were successfully established. The following is an example of how to use a cell phone. 1)CaM The expression of mRNA in the cell was confirmed by PCR. Wild type PC12 cells CaM II mRNA 2) The application of CaM II The cell was identified by the discovery of the virus. Wild-type PC12 cells are weak in antibody resistance, and the presence of anti-virus in PC12 cells is indicated. 3)PCR method was used to obtain cDNA of 4 kinds of DNA. Wild-type PC12 cells were found to be resistant to infection. 4) Microtubule protein 2(MAP2) phosphorylation was enhanced in the cells. The intracellular concentration of this protein was increased by stimulation. 5)In wild-type cells, the intracellular concentration of MAP2 increased and the phosphorylation of MAP2 decreased. This is the first time that I've seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. 6)Cell growth is inhibited by dibutyryl cyclic AMP. The inhibition of enzyme expression and correlation. The above results show that the phosphorylation of MAP2 is enhanced, and the morphological changes of neurons are affected. In the future, the effect of cell death on this enzyme will be discussed.