糖鎖タンパク質の細胞内輸送における糖鎖の役割解明

阐明糖链在聚糖蛋白细胞内运输中的作用

• 批准号: 12033205
• 负责人: 林 力丸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12033205/
• 关键词: 糖鎖; カルボキシペプチダーゼ; 糖タンパク質; プロカルボキシペプチダーゼY; 糖鎖の役割

細胞内選別輸送のモデルとしてパン酵母のカルボキシペプチダーセY(CPY)をとり上げ、糖鎖構造の役割解明を目的とし、以下の成果をあげた。1.糖鎖結合部位を限定した変異体タンパク質を単離精製し、その構造安定性を物理化学的手法(DSC、円偏光二色性、蛍光分光法など)を主として用いて解析し、糖鎖結合部位が及ぼす立体構造への寄与を検討した。その結果、糖鎖の構造への寄与は少ないことを明らかにした。2.作成した変異体タンパク質を単離精製し、活性と全体構造との関係を調べ、機能保持に糖鎖は役割をもたないことを明らかにした。3.極限環境下における精製タンパク質を用いた高圧力環境下での構造安定性を検討し、プロカルボキシペプチダーゼYにとって、糖鎖が構造安定性に重要なことを明らかにした。

The following results were obtained from the study of intracellular selective transport in yeast cells: 1. Carbohydrate binding site definition, quality separation, structural stability, physicochemical methods (DSC, polarization dichroism, fluorescence spectroscopy), main application analysis, carbohydrate binding site identification and structural analysis As a result, the structure of the sugar lock is transmitted to the lower part of the body. 2. The quality of the product is refined, the activity is adjusted, and the function is maintained. 3. Structural stability in extreme environments is important for structural stability analysis, optimization, and sugar locking.

项目成果

E.Chatani: "Expression of soluble bovine pantreatic ribonuclease A in Picchia pastoris and its purification and characterization"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64. 2437-2444 (2000)

E.Chatani：“可溶性牛泛性核糖核酸酶 A 在毕赤酵母中的表达及其纯化和表征”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64. 2437-2444 (2000)

H.Nakase: "Interaction mode of H397A mutant carboxypeptidase Y with protein substrates analysed by the surface plasmon resonance"Bull.Chem.Soc.Jpn.. 73. 2587-2590 (2000)

H.Nakase：“通过表面等离子体共振分析的H397A突变型羧肽酶Y与蛋白质底物的相互作用模式”Bull.Chem.Soc.Jpn..73.2587-2590(2000)