部分ペプチドを用いた蛋白質・蛋白質相互作用の解析

使用部分肽分析蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

批准号：
12034206
负责人：
若松馨
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.レセプターによるG蛋白質を活性化にはα5ヘリックスとβ2/β3ループの間の塩橋が必須であることをGi1αについて示してきた。一方、報告されているGsαのX線結晶構造には塩橋が存在しないが、アミノ酸配列の保存性からそのX線結晶構造が間違っている可能性がある。塩橋をなくしたGsαのmutantはレセプターで活性化されなかったことから、塩橋はG蛋白質一般に必須であることが確認された。また、m4ムスカリンレセプターの部分ペプチドはm4レセプターと同様にGsを活性化せずGi1を強く活性化したことから、m4レセプターの良い低分子モデルとなる事が確認された。2.生体膜に結合した時のペプチド・蛋白質の構造を解析する時の膜のモデルとしてbicelleを光散乱及びNMRで検討した。CHAPSOはDHPCに比べて広い濃度・温度範囲で安定したbicelleを形成することがわかり、DMPC/CHAPSOとDLPC/CHAPSOについて流体力学半径を決定した。また、ペプチドを取り込んでも半径はほとんど変化しない事を確認した。bicelleに組み込んだMPX-Gは低温でも良好なHSQCスペクトルを与えたので、bicelleは膜蛋白質のNMRにも有効であると期待された。3.細菌の細胞膜に穴を開けることによって殺菌作用を示すマガイニン2は、脂質二重膜中に結合した時に2本のαヘリックスが逆平行になったダイマーを形成する事をTRNOEで既に決定している。この構造が正しい事を確認するために、構造を保持したままSS結合で架橋されたダイマー(SSダイマー)をデザイン・化学合成した。事実、SSダイマーはモノマーのマガイニン2と協同的に作用しモノマーの活性を高める事がわかった。

1。已显示GI1α表明α5螺旋和β2/β3环之间的盐桥对于通过受体激活G蛋白是必不可少的。另一方面，尽管在GSα的X射线晶体结构中不存在盐桥，但由于氨基酸序列的保护，X射线晶体结构可能不正确。由于从盐桥中消除的GSα突变体并未被受体激活，因此可以证实盐桥通常对于G蛋白是必不可少的。此外，M4毒蕈碱受体的部分肽没有激活GS，类似于M4受体，并强烈激活GI1，这证实了它是M4受体的良好低分子模型。 2。通过光散射和NMR作为膜模型来检查Bicelle，以分析与生物膜结合时的肽和蛋白质的结构。发现CHAPSO在更广泛的浓度和温度范围内形成稳定的bicelle，而DMPC/CHAPSO和DLPC/CHAPSO确定了流体力学半径。也证实，即使掺入肽，半径也几乎不会改变。由于在Bicelle中掺入的MPX-G即使在低温下也具有良好的HSQC光谱，因此预计Bicelle也将在膜蛋白的NMR中有效。 3。已经由trnoe确定，弹药2通过在细菌的细胞膜中钻孔表现出杀菌特性，形成二聚体，其中两个α-螺旋在与脂质双层结合时会变为抗平行。为了确认这种结构是正确的，我们设计和化学合成的二聚体（SS二聚体）在保留结构的同时通过SS键交联。实际上，已经发现SS二聚体与单体杂志2结合起来增加单体的活性。