膜蛋白質の構造解析を推進する試薬の開発

开发促进膜蛋白结构分析的试剂

• 批准号: 19036001
• 负责人: 若松 馨
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19036001/
• 关键词: ソフトな相互作用; 蛋白質; NDSB; 凝集; 熱変性; NMR; 重水素化; 合成; 膜蛋白質; 界面活性化剤; 安定化; 構造解析; G蛋白質; Gq

ヒトのガン関連遺伝子のようにソフトな相互作用をする蛋白質は創薬のターゲットとなっている. しかし, これらの蛋白質は単独では特定の立体構造を形成しない不定形配列を有するので, 凝集しやすく立体構造を解析しにくいという問題がある. 蛋白質の凝集を防止し結晶化に利用されてきたnon-detergent sulfobetaine(NDSB)のNMR測定への応用を我々は主に研究した. その成果を以下に列挙する.1. NDSBは種々の蛋白質の熱変性温度を上昇させた(0.5Mで約4℃). これによりNMRの測定温度は10℃以上上げる事ができ, 質の高いスペクトルが得られるようになった.2. 常温でのNMR測定における蛋白質の凝集はグルタミン酸とアルギニンの等モル添加により防止される事が示されているが, この添加物は高温での安定性は向上させなかった. また, グリセロールはシグナルをブロードにするので, 高温での測定にはNDSB類がベストであった.3. 市販のNDSBは重水素化が困難なので, 重水素化が可能なNDSB-newとその重水素化物を合成した. NDSB-newは強い凝集防止能を示した. また, 重水素化NDSB-newの存在下でaFGFの構造をNMRで決定した. その構造はX線で決定した構造と有意な差がなかった.4. NDSB-newは安価に大量に合成する事が可能であり, 蛋白質の精製過程でbufferに添加する事も可能である. 凝集しやすく濃縮中に沈殿してしまう2種類の蛋白質はNDSB-newの添加により濃縮でき, 濃度も収率も20倍以上に上げる事ができた.

しかし,これらのprotein is unique and has a specific three-dimensional structure. It is formed into an amorphous arrangement and has an amorphous arrangement. Aggregation and three-dimensional structure analysis and problem analysis. Protein aggregation and prevention of crystallization and utilization are non-detergent. The NMR measurement of sulfobetaine (NDSB) was carried out by me. The results are listed below. 1. Thermal resistance temperature of NDSB protein does not rise (0.5M is about 4℃). The measurement temperature of NMR is higher than 10℃ or more, The quality is high and the quality is high. 2. NMR measurement of protein agglutination at room temperatureルギニンのwaitモルaddedによりpreventされる事がshowされているが,このAdditives は High temperature stability は Up させなかった. High-temperature measurement of NDSB-type NDSB. 3. Commercially available NDSB is difficult to oxidize heavy water, and NDSB is possible to oxidize heavy water. NDSB-new heavy hydride is synthesized. NDSB-new's strong aggregation prevention ability has been demonstrated. In the presence of heavy hydrogenated NDSB-new, the structure of aFGF has been determined by NMR.そのstructural and The protein refining process does not allow the buffer to be added. Agglutination and concentration of 2 kinds of proteins in NDSB-new are concentrated, and the concentration and yield are more than 20 times higher.

项目成果

Effect of NDSB on the protein aggregation

NDSB 对蛋白质聚集的影响

• 发表时间: 2008
• 期刊: Trans. Materials Res. Soc. J. 33
• 作者: S. Kado;K. Kubota;N. Nameki;and K. Wakamatsu
• 通讯作者: and K. Wakamatsu

Stabilization of proteins for solution NMR measurements

用于溶液 NMR 测量的蛋白质稳定性

• 发表时间: 2008
• 作者: Kaori Wakamatsu;Takeshi Ishii;Long Xian;Kazuo Hosoda;Mayu Enomoto;Naoya Tochio;Shin-ichi Tate;Yusuke Inoue;Nobukazu Nameki;Toshiyuki Kohno;Kenii Kubota
• 通讯作者: Kenii Kubota

Discovery of mitocryptide-1, a neutrophil-activating cryptide from healthy porcine heart

发现 mitocryptide-1，一种来自健康猪心脏的中性粒细胞激活隐蛋白

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Biol Chem 283
• 作者: Mukai H;Hokari Y;Seki T;Takao T;Kubota M;Matsuo Y;Tsukagoshi H;Kato M;Kimura H;Shimonishi Y;Kiso Y;Nishi Y;Wakamatsu K;Munekata E.
• 通讯作者: Munekata E.

NMR測定における蛋白質の凝集防止と安定化

NMR 测量中蛋白质聚集的预防和稳定

• 发表时间: 2007
• 作者: 若松;ら
• 通讯作者: ら

Peptide fragment of the m3 muscarinie acetylcholine receptor activates Gq but not Gi2

m3 毒蕈碱乙酰胆碱受体的肽片段激活 Gq 但不激活 Gi2

• 发表时间: 2008
• 期刊: J. Pept. Sci. 14
• 作者: M. Kubota;and K. Wakamatsu
• 通讯作者: and K. Wakamatsu