部分ペプチドを用いた蛋白質・蛋白質相互作用の解析

使用部分肽分析蛋白质-蛋白质相互作用

基本信息

批准号：
13014204
负责人：
若松馨
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014204/
关键词：
G蛋白質レセプター部分ペプチドマガイニンバイセル活性化

项目摘要

1.ユビキチン融合蛋白質を用いた安定同位体ラベルペプチド発現系の発現効率を上げることに成功した。マストパランXについては、融合蛋白質全体のcodonusageを大腸菌に合わせること、mRNAの分解が少ないBL21 star(DE3)ホストを用いること、大腸菌の破砕の段階から変性剤を加えることによって、調製できる量が7倍に向上した。マガイニン2については通常のM9培地では全く発現しなかったが、BL21/pLysSホストを用いること、CHL培地を用いることによって発現できるようになった。2.我々の作成したm4レセプターの部分ペプチド[m4I3C(14)]が三量体G蛋白質の一種であるGiを選択的かつ強力に活性化できることを明らかにした。m4I3C(14)に似たペプチドであるM-IIIはGoだけでなくGqも活性化し特異性が低かったが、m4I3C(14)によるGqの活性化は弱かった。また、従来三量体G蛋白質の活性化に頻用されていたマストパランは細胞膜の三量体G蛋白質だけでなく低分子量G蛋白質も活性化したが、m4I3C(14)は細胞膜の三量体G蛋白質を特異的に活性化できることがわかった。3.bicelleについて光散乱とX線散乱によるcharacterizationを行った。DMPCとCHAPSOで作るbicelleはq値(DMPC/CHAPSOのモル比)が1.2以下では当初予想されていたdiskの形状を取っていることが確認されたが、qが1.5以上ではdiskではなく長いヒモの形状を取っていることが明らかになった。また、q=1のbicelleではdiskの周辺部だけでなくbilayer部分にもCHAPSOが存在していることが明らかとなった。

1。我们成功地提高了使用泛素融合蛋白的稳定同位素标记的肽表达系统的表达效率。对于乳腺X，使用BL21恒星（DE3）宿主将整个融合蛋白的代码蛋白与大肠杆菌相结合，可以增加7倍，而BL21恒星（DE3）宿主几乎没有mRNA降解，并从大肠杆菌中断的阶段添加了变性剂。在正常的M9培养基中根本没有表达杂志2，但是可以使用BL21/PLYSS宿主和CHL培养基表达它。 2。我们已经揭示了我们的M4受体的部分肽[M4I3C（14）]可以选择性地激活GI，这是一种三聚体G蛋白。 M-III，类似于M4I3C的肽（14），不仅激活了，而且gQ也很低，而且M4I3C（14）的GQ激活较弱。此外，以前经常用于激活三聚体G蛋白的Mastparan不仅激活细胞膜中的三聚体G蛋白，还可以激活低分子量G蛋白，但发现M4I3C（14）可以特异性地激活细胞膜中的三聚体G蛋白。 3。比塞尔的特征是光散射和X射线散射。已经证实，用DMPC和Chapso制成的Bicelle采用磁盘的形状，当Q值（DMPC/CHAPSO的摩尔比）为1.2或更低时，这是预期的，但是当Q值为1.5或更高时，它的形状为1.5或更高时，它的形状是长的，而不是磁盘而不是磁盘。还揭示了Chapso不仅存在于磁盘的外围，而且存在于Q = 1的双层部分。