抗原受容体遺伝子の対立形質排除のメカニズム

抗原受体基因的等位排除机制

基本信息

批准号：
12051212
负责人：
西住裕文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、抗原受容体遺伝子のV(D)J組み換えを制御する分子機構を解明する事を通して、最終的に対立形質排除の分子メカニズムを明らかにすることを目的としている。申請者らは、Igκ軽鎖遺伝子のV-J組み換えを負に調節する、3'エンハンサー(E3')領域内のPU.1結合配列に会合し、PU.1の働きと拮抗する別の蛋白質がリプレッサーとして存在すると想定してスクリーニングを行い、B細胞に限局して発現するPU.1に類似の遺伝子prf(PU.1 related factor)を単離した。そこでこの新規タンパク質Prfの生理的な機能を解明するために、prf遺伝子欠失マウスの樹立を試み成功した。このノックアウトマウスは、正常に成長し繁殖した。まずIgκ軽鎖遺伝子のV-J組み換え制御に関し遺伝子欠損の影響を調べたが、野生型と同様にV-J組み換えは厳密な制御を受けていた。引き続いて発現が限局しているB細胞を中心に詳細な解析を加えた。FACscanにより主としてB細胞の分化過程に異常がないか解析したが、野生型と大きな変化は見られなかった。また脾B細胞の種々の刺激に対する増殖応答活性にも野生型と大差はなかった。しかしprf遺伝子欠失マウスは無免疫状態において血清中に野生型より数倍高い量の抗体を含んでいることが明らかとなった。その抗体中には抗核抗体など自己抗体も含まれており、マウスを長期飼育しておくと自己免疫疾患様の症状を呈することが期待される。これまでの解析の結果において、遺伝子欠損の影響が余りみられなかった理由の一つに、Prfと類似の転写因子PU.1及びSpi-Bが、Prfの機能を相補していた可能性がある。よってprfとPU.1あるいはSpi-Bとの多重遺伝子欠損マウスを作製していく必要があると思われる。今後はprf遺伝子欠失マウスの解析を進めると共に、再度Igκ軽鎖遺伝子のV-J組み換えを負に調節するリプレッサー候補因子を単離する必要があり、現在新たなスクリーニング方法を導入し、遺伝了探索を試みている。

这项研究旨在通过阐明调节抗原受体基因的V（d）J重组的分子机制来最终阐明等位基因排除的分子机制。申请人筛选了3个“增强子（E3'）区域中的PU.1结合序列的基因PRF（PU.1相关因子），该序列对Igκ光链基因的V-J重组进行了负调节，假设另一种蛋白质是pu.1在抑制剂中的作用，则在抑制剂中拮抗了基因PRF（pUFF prf prf prf prf prf ins p prf ins by.1）。因此，为了阐明这种新蛋白的生理功能，我们成功地建立了一只没有PRF基因的小鼠。这种淘汰的鼠标会成长并繁殖。首先，我们研究了基因缺乏对IGκ光链基因V-J重组的控制的影响，但是与野生型一样，V-J重组受到严格的控制。随后，主要在表达有限的B细胞上进行详细分析。 FACSCAN分析了B细胞分化过程的异常，但未观察到野生型的重大变化。此外，脾B细胞对野生型的各种刺激的增殖反应活性没有显着差异。然而，据表明，缺乏PRF基因的小鼠在血清中含有比PRF基因中野生型高几倍。这些抗体还含有自身抗体，例如抗核抗体，预计如果长时间保留小鼠，它们会产生类似于自身免疫性疾病的症状。在先前的分析中，基因缺乏症没有显着影响的原因之一是，转录因子PU.1和SPI-B类似于PRF，是PRF功能的补充。因此，似乎有必要产生小鼠在PRF和PU.1或SPI-B之间缺乏多个基因。将来，我们将继续分析已删除PRF基因的小鼠，我们需要分离候选候选抑制剂因子，这些因素对IGκ轻链基因的V-J重组负面调节，并且我们目前正在引入一种研究遗传学的新筛选方法。